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研究表明恶性肿瘤患者普遍存在血液高黏、高凝、高聚状态,高黏度的血液有利于肿瘤细胞的转移扩散。目前一些具有抗血小板凝集、抗肿瘤以及具有免疫刺激活性的活血化淤中药在肿瘤防治过程中的作用引起了人们较多的关注。利用传统化瘀名方中的一味具有抗血小板作用的药物全草植物中经分离、提取及初步精致得到的药物有效成分罗勒多糖,该课题通过动物模型及对肿瘤细胞系的作用效果,观察罗勒多糖在动物体内、体外对肿瘤细胞侵袭、转移行为的影响,为此药的进一步开发和临床推广应用提供理论依据。该课题的研究内容主要包括对罗勒多糖处理后的3AO细胞增殖、侵袭功能及其表面CD44分子表达的检测、罗勒多糖对卵巢癌大鼠模型及小鼠肿瘤肺转移模型的肿瘤生长、侵袭和转移的影响、表达谱基因芯片对肿瘤侵袭相关基因的检测、分析等内容。
首先用流式细胞仪检测不同浓度罗勒多糖处理的3AO细胞表面CD44的表达情况。药物作用48小时后,CD44的表达量明显降低(P<0.05),说明罗勒多糖能够明显的降低CD44的表达。同时用Maetrigel穿膜法检测了罗勒多糖对3AO细胞侵袭性的影响,罗勒多糖作用后有侵袭力并能穿过人工基底膜的3AO细胞数呈显著下降趋势;用MTT法检测了不同浓度的中药罗勒多糖对人卵巢癌细胞3AO增殖活性的影响,结果显示大剂量及中剂量中药罗勒多糖作用后,3AO细胞增殖活性受到了明显的抑制(P<0.05)。
通过腹腔注射建立荷NuTu-19卵巢癌大鼠模型,以灌胃给药的方式用罗勒多糖和生理盐水处理,从腹水量、腹腔脏器转移程度、肿瘤结节大小、大网膜转移情况及生存期等方面观察各组肿瘤生长及转移情况,发现罗勒多糖处理组以上各项指标均优于盐水对照组。通过小鼠肿瘤肺转移模型(Lewis肺癌自发转移)的建立,分别用不同浓度的罗勒多糖进行治疗,以生理盐水作为对照,结果发现罗勒多糖对肿瘤的肺转移具有显著的抵抗作用,不仅使转移结节数明显减少,而且侵袭范围明显缩小。
取药物组与盐水对照组脾组织,提取总RNA、逆转录、PCR扩增、标记后与R20s大鼠表达谱芯片杂交,经GenePixPro3.0图像处理软件分析,获得大量差异表达基因,2通过对sIL-4R、AnnexinⅠ、MHCⅠ等差异表达基因的分析对罗勒多糖的抗肿瘤效应机制进行了探讨,认为罗勒多糖可以通过抑制Th2类细胞的活性,增强抗肿瘤的细胞免疫的功能;可通过上调AnnexinⅠ抑制磷脂酶A2的活性,阻断了由PGE2介导的Th1类细胞及其产生的细胞因子的抑制作用,提高了细胞免疫的功能,阻断了PAF介导的促凝过程,改善血液流变学状态来抑制肿瘤的恶性表型;还可通过上调淋巴细胞表面MHC分子的表达提高机体的免疫状态,抵抗肿瘤的恶性侵袭。
由上述动物体内、体外实验可认为罗勒多糖具有较强的抑制肿瘤侵袭和转移的作用,其抗肿瘤侵袭、转移是多个药效靶点综合作用的结果,具有较广阔的应用前景。