手性杀菌剂呋吡菌胺立体选择性方法及生物效应研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:c2t2dy20
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在农业生产中,酰胺类杀菌剂使用广泛。手性酰胺类杀菌剂因其化学结构中含有手性中心原子,因此其对映体在环境中往往存在立体选择性差异。传统的农药评价手段忽视了手性农药在对映体层面的安全性。呋吡菌胺是一种新型手性酰胺类杀菌剂。因其高效广谱等特点,具有良好的应用前景。然而其在对映体层面的的残留分析方法以及生物效应尚未明确。本文建立了呋吡菌胺在稻田土壤中的手性分析方法,明确了呋吡菌胺对映体对四种常见病原物的立体选择性活性,同时探明了其对两种水生非靶标生物的立体选择性毒性差异。研究结果为科学、全面地开展评价呋吡菌胺在对映体层面的安全性评价提供了数据支撑,具有良好的现实意义。本文的具体研究成果如下:1.采用反相手性固定相结合超高效液相色谱质谱联用(UPLC-MS/MS)技术,对分离呋吡菌胺对映体的质谱条件及色谱条件进行了多重实验和过程优化,建立了呋吡菌胺对映体手性拆分的UPLC-MS/MS仪器分析方法;在Chiralcel OX-3R手性柱上,S-(-)-呋吡菌胺先流出,R-(+)-呋吡菌胺后流出;优化了 QuEchERS前处理方法,建立了呋吡菌胺在土壤的手性残留分析方法。对比了不同手性柱、不同流动相、流动相不同比例、流速、色谱柱温度等对呋吡菌胺对映体分离的影响。最终确定了呋吡菌胺手性分离的最佳色谱条件:即选择Chiralcel OX-3R手性柱,最佳的色谱分离条件为:流动相为A相:0.1%甲酸+10 mmol乙酸铵水溶液,B相:乙腈,流速为0.6 mL/min,进样量5μL,柱温为25℃。对映体达到良好分离效果;采用MRM方式,对目标手性化合物的质谱条件进行优化。选择的离子源为电喷雾离子源,正离子电离(ESI+)毛细管电压:1.5 kv;反吹气流量:50 L/Hr;脱溶剂气流量:1000 L/Hr;脱溶剂气温度:600℃;离子源温度:150℃.最终确定了呋吡菌胺手性分离的最佳色谱条件。建立了水稻土壤中呋吡菌胺的手性残留分析方法,两种对映体的添加回收率为85.6%-100.2%,RSD 为 1.8%-8.3%。2.本文研究比较了S-(-)-呋吡菌胺、R-(+)-呋吡菌胺和Rac-呋吡菌胺对4种植物病原真菌(玉米纹枯病菌、小麦赤霉病菌、水稻纹枯病菌、草莓灰霉病菌)的抑菌活性差异。采用菌丝生长抑制方法,结果表明:Rac-呋吡菌胺对水稻纹枯病的抑菌活性最高,对草莓灰霉抑菌活性最弱;呋吡菌胺对水稻纹枯病菌、草莓灰霉病菌,抑菌活性为顺序为:S-(-)-呋吡菌胺>Rac-呋吡菌胺>R-(+)-呋吡菌胺;对于小麦赤霉病菌和玉米纹枯病菌,抑菌活性顺序为:S-(-)-呋吡菌胺>R-(+)-呋吡菌胺>Rac-呋吡菌胺。S-(-)-呋吡菌胺为优映体。3.开展了呋吡菌胺及其对映体对两种水生生物(大型溞和羊角月牙藻)的急性毒性实验,结果表明:呋吡菌胺及其对映体对大型溞的急性毒性存在一定差异、但差异不明显。Rac-呋吡菌胺、R-(+)-呋吡菌胺和S(-)-呋吡菌胺的48h的EC50分别是3.894mg/L、5.345 mg/L、3.278mg/L;呋吡菌胺及其对映体对羊角月牙藻的急性毒性有差异但较小,从大到小为S-(-)-呋吡菌胺>Rac-呋吡菌胺>R-(+)-呋吡菌胺;得出的Rac-呋吡菌胺、R-(+)-呋吡菌胺和S-(-)-呋吡菌胺的72h的EC50分别0.233mg/L、0.340mg/L、0.172mg/L。
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