论文部分内容阅读
本研究从BHK-21细胞培养的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒总RNA，通过反转录PCR(Reverse transcript PCR，RT-PCR)技术进行狂犬病病毒结构基因的扩增，得到1352bp的N基因(核蛋白基因，nucleoprotein gene，N)，893bp的P基因(磷酸化蛋白基因，phosphoprotein gene，P)，608bp的M基因(基质基因，matrix protein gene，M)，1574bp的G基因(糖蛋白基因，glycoprotein gene，G)，3372bp的L1基因(大转录蛋白1，large protein gene1，L1)以及3012bp L2基因(大转录蛋白2，large protein gene2，L2)，并将其分别连接于pMD19-T载体，进行测序并与SAD B19株比对，实验结果如下：N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列与SAD B19株的核苷酸同源性分别为100%、99.66%、99.67%、99.04%、100%及98.70%，氨基酸序列的同源性分别为100%、98.99%、100%、98.65%、100%以及99.91%。应用重组PCR技术进行基因片段的拼接，构建增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热病毒N蛋白基因的重组质粒(pT-eGFP-CDV N)、狂犬病病毒融合基因P-M的重组质粒(pT-PM)以及融合基因L1-L2的重组质粒(pT-L)。实验结果如下：通过重组PCR技术获得的融合基因eGFP-CDV N、P-M和L的片段分别为2292bp、1501bp和6384bp，重叠区域完全重合，未发生突变及错位。本研究成功构建融合基因片段，为狂犬病病毒SRV9株全长cDNA的构建以及RV减毒重组基因疫苗的研究探索条件。