论文部分内容阅读
姬松茸(Agaricus blazei Murill)是一种常见的大型药食两用真菌,其主要功能性成分为多糖。因其具有抗肿瘤、抗辐射等多种生理活性而受到重视。本论文在本研究室真菌发酵工作的基础上,研究了姬松茸多糖的深层发酵工艺、胞外多糖提取工艺及中草药提取液的制备工艺。通过添加适量的贵州特色中草药提取液,考察了姬松茸多糖的变化情况,对富硒及芦丁的姬松茸发酵液进行了抗肿瘤活性筛选研究。 本论文对姬松茸深层发酵培养的各种营养因子进行了单因素试验、Plackett-Burman筛选试验及正交试验。结果表明蔗糖、酵母膏和无机盐,在一定浓度下有利于姬松茸菌体生长和胞外多糖的形成。确定了姬松茸深层发酵培养基为:蔗糖45 g/L,酵母膏3 g/L,KH2PO42.5 g/L,MgSO41.25 g/L。姬松茸深层发酵的最适工艺条件为:培养温度27℃,培养时间7d,接种量12%、pH值自然、250mL摇瓶装液量为120mL、摇床转速170r/min。在此基础上测得的最大姬松茸胞外多糖浓度可达3.64g/L。 通过试验得出,姬松茸发酵胞外多糖的最佳提取工艺为:第一步沉淀时采用30%的乙醇浓度;第二步沉淀时采用70%的乙醇浓度;静置温度为4℃;静置时间为24h。此工艺条件提取姬松茸胞外多糖较为合适。 通过试验确定,中草药乙醇提取液的制备工艺条件为:乙醇浸提浓度为75%,浸提温度为15℃,浸提时间为24h。 研究了六种贵州特色中草药(野葱、刺梨、鱼腥草、苦荞、天麻和山药)乙醇提取液对姬松茸深层发酵的影响,对其进行了单因素试验和正交试验。考察综合生物量、胞外多糖产量、硒及芦丁含量四项指标,得出添加30%高山苦荞粉乙醇提取液和20%野葱乙醇提取液,或者添加25%高山苦荞粉乙醇提取液和20%野葱乙醇提取液的效果最佳,该条件下的姬松茸多糖产量分别可达4.78g/L和4.83g/L。对富硒及芦丁的姬松茸发酵液进行了抗肿瘤活性筛选试验,结果表明:后者的抑制效果较好,当其浓度为0.2mg/ml时,对肺癌细胞A549的抑制率达到37.62±5.67%。两者对白血病细胞K562都没有抑制作用。