屎肠球菌对新型大环内酯类药物Solithromycin及新补骨脂异黄酮的敏感性初步研究

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【实验目的】1、研究我院122株屎肠球菌临床分离株对新型大环内脂类药物Solithromycin的敏感性及与耐药基因(erm A、B、C)之间的关系。2、初步评估新补骨脂异黄酮对屎肠球菌的抑菌活性特点。【实验方法】1.菌株分离、鉴定:本课题临床分离收集深圳市南山区人民医院2011年-2017年共122株屎肠球菌菌株。所有菌株均通过BD Phoenix TM 100自动细菌鉴定/药敏系统鉴定。2.琼脂平板稀释法测最小抑菌浓度(MIC):采用琼脂平板稀释法测定我院分离屎肠球菌对红霉素和Solithromycin的MIC值。3.DNA提取及耐药基因检测:将保存的屎肠球菌复苏培养后12-16h后根据说明书操作方法用DNA提取试剂分别提取菌株的基因组DNA,随后通过PCR扩增法检测耐药基因erm A、B、C。4.肉汤稀释法测新补骨脂异黄酮的MIC值:选取7株临床代表菌株采用微量肉汤稀释法检测阿奇霉素、Solithromycin、利奈唑胺、万古霉素及新药新补骨脂异黄酮的MIC值。5.新补骨脂异黄酮联合其他抗生素抑制屎肠球菌生长作用的研究:采用自动微生物生长曲线分析仪Bioscreen C MBR,将新补骨脂异黄酮与其他抗生素联合作用于屎肠球菌,测定细菌的生长曲线,分析新补骨脂异黄酮与其他抗生素抗菌的协同作用。【结果】1.我院临床分离屎肠球菌对传统大环内酯类药物红霉素耐药率达85.2%,56.6%的菌株对新型大环内酯类药物Solithromycin的MIC值为4μg/ml。2.本院分离的屎肠球菌中,携带耐药基因erm A、B、C的菌株比例分别为9.8%、32.7%、45.9%;erm(+)屎肠球菌菌株中,有68.1%菌株的Solithromycin的MIC值为4μg/ml。3.肉汤稀释法提示新补骨脂异黄酮的MIC≥50μmol/ml;生长曲线测定结果提示新补骨脂异黄酮在1/2MIC浓度下有一定的抑菌活性,新补骨脂异黄酮与Solithromycin、利奈唑胺联合作用具有初步协同作用。【结论】1、本院分离的所有屎肠球菌(包括erm基因阳性)Solithromycin的MIC值均不超过4μg/m L,Solithromycin比红霉素具有更强的抗菌活性;Solithromycin是否能克服erm基因带来的耐药问题仍有待进一步研究。2、新补骨脂异黄酮具有初步的抑制屎肠球菌活性,与Solithromycin、利奈唑胺联合作用时表现为初步协同作用,可能可以加强抗生素的抗菌活性;与万古霉素联合时无明显协同作用;新补骨脂异黄酮的具体抗菌机制还有待进一步研究。
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