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目的:观察A2AR拮抗剂对体外加压培养的大鼠视网膜Müller细胞的GS、GLAST是否具有调控作用;完善视网膜Müller细胞的机能作用,为青光眼治疗提供新的治疗方向和药物。
方法:应用血气分析法检测不同压力模型(0,20,40,60,80mmHg/24h)中PH值,PCO2值,PO2值。应用GFAP、GS免疫荧光鉴定Muüler细胞。应用Realtime-PCR,Westernblot检测不用压力模型(0,20,40,60,80mmHg/24h)中GS、GLAST的表达情况。挑选最佳压力组。使用0.1,1.0,10μM SCH442416处理Müller细胞。应用Realtime-PCR,Western blot检测在最佳压力下不同药物浓度组GS、GLAST的表达情况。
结果:各压力组(0,20,40,60,80mmHg/24h)PH值,PCO2值,PO2值间差异无统计学显著性意义(P>0.05)。GFAP、GS免疫荧光鉴定:本次实验所培养细胞90%以上为Müller细胞。Realtime-PCR,Western blot检测:40mmHg/24h组,60mmHg/24h组,GS表达明显升高,与空白对照组(0mmHg/24h)相比,差异有统计学显著性意义(P<0.05)。40mmHg/24h组,GLAST表达明显升高,与空白对照组(0mmHg/24h)相比,差异有统计学显著性意义(P<0.05)。40mmHg/24h组作为最佳压力组,进行下一步的实验。Realtime-PCR,Western blot检测:10μM SCH442416-40mmHg/24h组,GS、GLAST的表达明显升高,分别与空白对照组(0mmHg/24h)、40 mmHg/24h组(单纯加压)相比,差异均有统计学显著性意义(P<0.05)。
结论:1.本实验建立了成熟稳定、高效的视网膜Müller细胞的培养和纯化方法。通过该方法可获得较高纯度和产量的视网膜Müller细胞。2.本实验建立的新型密闭式压力模型成功有效。3.中等程度的压力可上调Müller细胞GS、GLAST的表达。在40 mmHg/24h组,GS、GLAST的表达均明显升高。4.A2AR拮抗剂能上调中等压力下Müller细胞GS、GLAST的表达,这可能加速Müller细胞对谷氨酸的转化,调整细胞外谷氨酸的浓度。