背景:结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是一种常见的消化道恶性肿瘤。据世界卫生组织(WHO)2018年新发布的癌症数据显示,CRC在全球范围内发病率及死亡率高,分别排名第三和第二,严重威胁人类生存健康。其在我国的发生及死亡率也逐年增长。散发性结直肠癌(sporadic colorectal cancer,sCRC)是一种不具有家族遗传性的CRC,主要是由体细胞多基因突变累加引起。本课题对实验室前期筛出的新的sCRC候选基因C9orf9,在体外对其进行功能验证。我们在LoVo、SW480两种CRC细胞中探索C9orf9对其增殖能力、迁移及侵袭能力的功能影响。研究方法1、对3例sCRC样本DNA进行了全外显子测序,发现C9orf9基因存在剪切位点突变,随后进一步扩大样本数进行C9orf9基因的深度测序,结合C9orf9在TCGA数据库中CRC正常组织及癌组织样本中的表达数据分析等进一步确定C9orf9作为sCRC新的候选基因的可信性。2、构建C9orf9的过表达质粒,在体外CRC细胞模型中进行转染,通过CCK8增殖实验、细胞周期及细胞凋亡检测实验、Transwell小室迁移侵袭实验、划痕实验研究C9orf9过表达对CRC增殖、迁移及侵袭的功能影响。3、选择能够有效抑制C9orf9表达的2个siRNA,在LoVo、SW480细胞中进行转染,通过CCK8增殖实验、细胞周期及细胞凋亡检测实验、Transwell小室迁移侵袭实验、划痕实验研究C9orf9表达缺失对CRC增殖、迁移及侵袭的功能影响。结果:1、TCGA数据分析显示:C9orf9在CRC肿瘤组织中低表达(P<0.001)。2、通过Western Blot实验确定两个(C9orf9-siRNA#2、C9orf9-siRNA#3)能抑制C9orf9表达的siRNA。3、通过质粒转染过表达C9orf9,一系列功能实验显示:该基因过表达不影响CRC细胞增殖,但是对CRC细胞的迁移及侵袭有明显抑制效果。4、利用C9orf9-siRNA#2、C9orf9-siRNA#3敲低C9orf9的表达,发现该基因敲低同样不影响CRC细胞增殖,却对迁移及侵袭能力有明显促进作用。结论:通过在LoVo、SW480两种细胞系中进行实验,结果发现C9orf9对CRC细胞的迁移、侵袭具有抑制效果,且作用明显。但是其无论过表达或是表达缺失,都对CRC细胞的增殖无显著影响。这暗示C9orf9基因可能通过影响CRC细胞转移参与CRC的进程。