研究背景乳腺癌仍然是女性患病率最高的肿瘤,占女性肿瘤死亡病因的第二位。绝经后乳腺癌的发病率在我国仍然处于各年龄段的高峰期。女性绝经后,体内激素水平发生了重大的变化,随着卵巢的衰竭,雌激素(Estradiol.E2)分泌水平的下降,下丘脑以及垂体失去了E2的负反馈,将分泌更多的卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone, FSH)以及黄体生成素(luteinizing Hormone,LH)。女性生命的1/3将在高促性腺激素水平中度过。抗雌激素以及其受体治疗是目前乳腺癌内分泌治疗的主要手段,但是仍然有许多乳腺癌患者不能从内分泌治疗中获益。除雌激素外,研究发现许多的内分泌激素与乳腺癌的发病以及进展相关,包括泌乳素(Prolactin, PRL),人绒毛膜促性腺激素(Human Chorionic Gonadotropin, hCG),LH等。这些激素协同或者直接影响乳腺癌的发生以及进展。近些年的研究发现,FSH参与了女性绝经后疾病的发生,但是FSH在乳腺癌发病中的研究尚没有详细的研究。有研究发现乳腺癌患者血清FSH水平与肿瘤的无复发生存率以及总生存率负相关。并且也有研究发现血清FSH水平与乳腺癌组织的Her-2表达相关。FSH通过其特异性受体(Follicle-stimulating hormone receptor, FSHR)介导细胞增殖,分化。FSHR一直被认为只在特异性组织中表达,即女性颗粒细胞以及男性睾丸支持细胞。近些年的研究发现,FSHR可以在众多的肿瘤细胞中表达包括卵巢癌,前列腺癌,子宫内膜癌,骨骼中表达。FSHR参与了这些肿瘤的增殖与转移。FSHR在骨骼细胞中表达被认为是绝经后女性骨质疏松的主要原因,而非是经典的雌激素途径。在最近的研究中发现,FSHR在许多实体肿瘤的血管内皮细胞中表达,这些表达在肿瘤与正常组织交界处。乳腺癌体外细胞系以及乳腺癌组织是否表达FSHR,以及FSH能否通过FSHR促进乳腺癌的发病仍然不明确。实验目的：选取绝经后病人对研究对象,研究血清FSH以及LH在女性乳腺癌病人和非肿瘤普通妇科炎症疾病对照人群中的差异性；研究血清FSH以及LH水平与绝经后乳腺癌细胞ER, PR, Her-2以及Ki67表达的相关性；研究FSH以及LH与乳腺癌临床分期,分级以及淋巴结转移的关系；研究FSHR是否在乳腺癌体外细胞系以及癌组织中表达。体外实验研究FSH是否促进乳腺癌细胞的增殖与转移,及其具体的分子机制；体内实验研究FSH是否会促进乳腺癌细胞的增殖。实验方法：第一部分：通过收取187名绝经后乳腺癌患者的病例资料以及内分泌数据,收集了同时期374名非肿瘤普通妇科炎症疾病的绝经后患者的内分泌检查数据。非肿瘤人群的构成主要为妇科的炎症性疾病,如阴道炎,宫颈炎等。建立数据库,统计分析FSH以及LH在绝经后乳腺癌患者与绝经后健康人群中的差异。分析FSH以及LH与乳腺癌的ER,PR,Her-2Ki67的表达,以及临床分期,分级,以及淋巴结转移的相关性。第二部分：体外实验研究FSH是否促进乳腺癌细胞的增殖与转移。使用MTT检测FSH对乳腺癌细胞系Bcap-37, MDA-MB-231的促增殖作用。使用Western Blot检测FSH刺激以上两株细胞引起的EGFR,ERK1/2, AKT等关键信号通路分子的激活改变。使用EGFR, ERK1/2等信号通路的抑制剂后,研究FSH促进增殖的主要作用信号通路。通过划痕试验研究FSH对Bcap-37,MDA-MB-231细胞系的迁移能力影响,使用基质胶Transwell实验研究FSH对以上两株细胞的侵袭能力影响,并通过Western Blot检测相应的分子机制。第三部分：体内实验研究FSH是否促进乳腺癌细胞系Bcap-37,MDA-MB-231移植瘤的增殖。通过对Balb/c裸鼠去势手术建立绝经后的动物模型。接种乳腺癌细胞系Bcap-37,MDA-MB-231到Balb/c裸鼠皮下。实验分为4组：假手术组,去势对照组,去势后使用GnRha组,去势后使用GnRHa然后使用FSH组。假手术组和去势对照组用于比较去势对肿瘤增殖的影响,GnRHa组使用GnRHa抑制裸鼠体内的FSH以及LH分泌,排除垂体分泌激素的影响。GnRHa加用FSH组,在GnRHa之后使用FSH使裸鼠体内的FSH达到100IU/L左右的绝经后水平。第四部分：检测FSHR在乳腺癌体外细胞系以及乳腺癌组织中的表达。使用RT-PCR,以及Reverse-PCR检测Bcap-37,MDA-MB-231等乳腺癌细胞系的FSHR表达情况。同时检测FSHR在17例乳腺癌临床样本中的表达情况。实验结果：第一部分：a)绝经后乳腺癌患者血清FSH, LH比对照人群高(61.83±1.475vs.48.13士1.256IU/L；27.83±0.74vs.23.88±0.6499IU/L)。b)绝经后乳腺癌患者血清FSH水平与肿瘤Ki67,Her-2表达正相关；LH水平与Ki67表达正相关。c)血清FSH,LH浓度与绝经后乳腺癌的肿瘤ER,PR,肿瘤的的临床分型,分级以及淋巴结转移情况没有相关性。第二部分：a)FSH可以促进入乳腺癌细胞系Bcap-37,MDA-MB-231的体外增殖,可以促进Bcap-37细胞的迁移。b)FSH通过EGFR/ERK1/2通路促进Bcap-37, MDA-MB-231细胞的增殖。第三部分：a)成功构建了绝经后的Balb/c nu/nu小鼠动物模型。b)FSH(≈100IU/L)可以促进乳腺癌细胞系Bcap-37.MDA-MB-231移植瘤的体内增殖。第四部分：Bcap-37,MDA-MB-231, MCF-7, T-47D, SK-BR-3, BT-474乳腺癌永生化细胞系以及17例乳腺癌病人癌组织无FSHR表达。实验结论：a)绝经后乳腺癌患者血清FSH和LH浓度较绝经后对照人群高；FSH水平与乳腺癌组织的Ki67,Her-2表达正相关；与乳腺癌的临床分型,分期,以及淋巴结转移不相关。b)FSH在体外通过EGFR/ERK1/2促进乳腺癌细胞系Bcap-37的增殖与转移,以及MDA-MB-231细胞的增殖。c) FSH (-100IU/L)可以促进乳腺癌细胞Bcap-37,MDA-MB-231裸鼠移植瘤的体内增殖。d)乳腺癌细胞系(Bcap-37,MDA-MB-231,Mcf-7,T-47D,SKBR-3,BT-474)以及乳腺癌组织样本中不表达FSHR。e) FSH在乳腺癌细胞中的具体作用靶点需要进一步的研究。