【摘 要】
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目的评估去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对外排泵系统Mex CD-Opr J介导铜绿假单胞菌头孢他啶耐药性的影响并探讨其相关机制。方法1、将0.5麦氏浓度的菌液稀释接种于96孔板内,棋盘稀释法加入NDGA和头孢他啶,同时设置不加药的对照组、NDGA对照组、头孢他啶对照组,培养24小时后,酶标仪测定吸光度,记录各药物的最低抑菌浓度(minimal in
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目的评估去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对外排泵系统Mex CD-Opr J介导铜绿假单胞菌头孢他啶耐药性的影响并探讨其相关机制。方法1、将0.5麦氏浓度的菌液稀释接种于96孔板内,棋盘稀释法加入NDGA和头孢他啶,同时设置不加药的对照组、NDGA对照组、头孢他啶对照组,培养24小时后,酶标仪测定吸光度,记录各药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),并计算抑菌率和部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration,FIC)。2、取上述96孔板内的菌液涂布法接种细菌,培养24小时:(1)计数菌落数。(2)实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测外排泵膜蛋白Mex C、Mex D、Opr J及nfx B基因的表达情况。结果1、与单用头孢他啶或NDGA相比较,头孢他啶与NDGA联合应用能更明显的抑制外排泵系统Mex CD-Opr J介导的头孢他啶耐药的铜绿假单胞菌的生长(P<0.05),头孢他啶与NDGA的药理主要表现为协同或相加作用。2、联合用药后,头孢他啶与NDGA的MIC值均明显降低,其中,部分头孢他啶的MIC值与头孢他啶敏感的铜绿假单胞菌质控菌株的MIC值无明显差异。3、与单用头孢他啶相比较,头孢他啶与NDGA联合应用后细菌外排泵膜蛋白Mex C、Mex D和Opr J的基因表达明显降低(P<0.05),而nfx B的表达明显升高(P<0.05)。结论NDGA能逆转外排泵系统Mex CD-Opr J介导铜绿假单胞菌头孢他啶的耐药性,其机制与其能够下调该耐药菌外排泵膜蛋白Mex C、Mex D及Opr J的表达、上调上述三个蛋白的负向调节基因nfx B的表达有关。
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