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针对目前苯脲类除草剂残留问题,本论文开展了对敌草隆农药的酶联免疫分析技术的研究。内容主要包括敌草隆人工抗原合成、多克隆抗体制备、相应的ELISA检测方法的建立、高效液相色谱法(HPLC)验证和实际水样检测。本研究制备了两种带有不同间隔臂长的敌草隆半抗原Hapten4C和Hapten6C。以N-甲基吡咯环酮为反应起始原料,水解制得中间产物N-甲基丁酸,然后与3,4-二氯苯异氰酸酯反应得半抗原Hapten4C1-(3-丙基羧基)-3-(3,4-二氯苯基)-1-甲基脲；以N-甲基己内酰胺为反应起始原料,水解制得中间产物N-甲基已酸,然后与3,4-二氯苯异氰酸酯反应,制得另一半抗原Hapten6C1-(5-戊基羧基)-3-(3,4-二氯苯基)-1-甲基脲。最后采用活化酯法将两种半抗原分别与KLH、BSA偶联制备了免疫原,与OVA、 BSA偶联制备了包被原,与HRP偶联制备了酶标抗原。用四种免疫原Hapten4C-KLH、Hapten6C-KLH、Hapten4C-BSA和Hapten6C-BSA分别免疫八只新西兰大耳白兔,采用背部皮下多点和肌肉注射法经过六次免疫制得敌草隆抗血清,效价在10,000-100,000之间。最佳抗血清是由Hapten4C-KLH免疫的兔编号为No.1产生,对100μg/L敌草隆标准品的抑制率高达85.5%。抗血清经Protein A-Sepharose4B作亲合层析介质纯化得到浓度为3.0mg/mL的敌草隆抗体。经优化,选择Hapten6C-OVA作为包被原,包被量为0.01μg/孔,抗体稀释比例为1：3000,封闭液为0.05%脱脂乳粉,PBS缓冲溶液pH7.4,建立敌草隆间接竞争酶联免疫法(icELISA)。该方法灵敏度(抑制中浓度)为IC50=0.48±0.09μg/L,最低检出限为IC15=0.038±0.007μg/L。然后选定抗体包被量0.25μg/孔,酶标抗原稀释比例为1：10000,封闭液为1%BSA, PBS缓冲溶液pH7.4条件下建立敌草隆直接竞争酶联免疫法(dcELISA).方法灵敏度为IC50=0.20±0.09μg/L,检出限为1C15=0.015±0.007μg/L。该抗体与其它12种苯脲类除草剂中的5种的交叉反应率较高,可用于苯脲类除草剂这一类物质的检测。对采白天津本地的娃哈哈纯净水、自来水和池塘水三种来源的阴性水样进行添加回收实验,用建立的dcELISA方法检测,回收率为89.04%-112.03%,变异系数小于10%。建立的dcELISA经高效液相色谱法(HPLC)验证一致性良好,证明了建立的敌草隆直接竞争ELISA检测结果的准确性,并且稳定可靠。最后用本研究建立的dcELISA法分析采集于澳大利亚的各种地表水,包括河水、泉水和废水。17个水样中有14个阳性样,含量为0.07-3.10μg/L。所有水样经dcELISA检测后,直接添加2μg/L的敌草隆标准品,回收率为96.6-129.1%。