蒙药白益母草质量标准及有效成分活性评价研究

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白益母草为唇形科脓疮草属植物Panzeria alaschanica Kupr.脓疮草(参见《中国植物志》65卷(2)p524)的干燥地上部分,是蒙医特色药材,具有活血调经、清热利尿、解毒消肿之功效。长期以来,蒙医将不仅将其作为治疗妇科疾病的良药,也作为抗高血压的常用药物之一,疗效显著。然而白益母草的物质基础研究却非常薄弱,药效学研究尚属空白,并且没有可控的药材质量标准,严重制约了其现代化进程。本论文根据文献考证和预试验研究结果,确定生物碱类和黄酮类成分为白益母草的主要有效成分,针对这两类成分进行分离纯化制备样品,应用现代科学方法进行药材质量标准化研究,并在细胞水平初步评价了其主要有效成分盐酸水苏碱的药效活性,最终为白益母草药材质量标准制定研究提供科学依据。本论文实验部分首先采用树脂柱层析法同时制备白益母草和益母草总生物碱及总黄酮样品,采用紫外分光光度法测定样品含量,结果显示SP825大孔树脂分离纯化得到的样品实现了纯度和收率的同步提高;采用HPLC-ELSD法检测样品盐酸水苏碱含量,发现盐酸水苏碱不仅是益母草也是白益母草总生物碱有效部位的主要成分;采用UPLC-Q-TOF-MS技术分析样品黄酮类成分,鉴定出其中15个黄酮类化合物,比较发现益母草主要含有芦丁,白益母草则主要含有异鼠李素-O-鼠李糖-O-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷和异鼠李素,二者共同含有芦丁、槲皮素-7-O-葡萄糖苷、山奈酚-O-鼠李糖-O-葡萄糖苷、椴树苷及其异构体等5个成分。以上结果为白益母草质量标准制定及进一步药效研究提供物质基础和依据。其次,通过基原鉴别、显微鉴别、理化鉴别,采用薄层色谱法、比色法和HPLC-ELSD法对白益母草药材质量控制方法进行了研究。以总生物碱、盐酸水苏碱和总黄酮为指标成分,对不同季节的药材和药材的不同部位进行含量测定比较,结果发现五月份采集药材所含总生物碱、盐酸水苏碱、总黄酮含量均为最高,其中生物碱类成分主要分布在花和茎部位,黄酮类成分主要分布在花和叶部位。因此,药材适宜夏初采收,取材时尽量保证部位均一。基于以上研究,根据《中国药典》2005年版要求拟定了白益母草药材质量标准草案。最后,于细胞水平对白益母草主要有效成分盐酸水苏碱进行活性评价,结果显示50μM和100μM的盐酸水苏碱可明显阻止H202损伤导致的心肌细胞线粒体膜电势的下降,提示盐酸水苏碱可能有潜在的抗心肌细胞凋亡的作用,也证实了以其作为白益母草药材质量控制重要指标的科学性和合理性。
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