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目的:探讨TRAIL、MG132对肺癌细胞的生物学效应及相关机制。方法:1.根据相关文献资料,确定肺癌细胞A549为研究对象,常规细胞培养,分别以不同浓度TRAIL(500,250,125,62.5,31.25,15.625,7.8125,3.90625μg/mL)、MG132(10,5,2.5,1μmol/L)干预24-48h,动态观察细胞形态学变化,并于第24、48h采用MTT法检测各组细胞生长情况,并计算药物半数抑制浓度(IC50)。2.取对数生长期肺癌细胞A549,分为对照组、TRAIL组、MG132组、TRAIL+MG132组,以相应组别药物分别干预细胞48h,动态观察细胞形态学变化;采用流式细胞仪技术检测各组细胞周期分布情况并计算细胞凋亡率的变化;第48h收集各组细胞,裂解法溶解细胞,提取各组细胞蛋白,采用蛋白印迹技术检测各组细胞凋亡相关蛋白caspase8、caspase9以及核转录因子NF-κB的表达变化。3.统计学方法:细胞生长抑制率与药物浓度之间的剂量效应关系采用Spearman秩相关分析;不同组别之间差异性的比较采用t检验;所有结果均以P<0.05表示差异有统计学意义。结果:1.MTT结果显示:TRAIL、MG132在体外对肺癌细胞A549均具有生长抑制作用;两药联合应用对细胞的生长抑制作用与单药组比较明显增强,差异有统计学意义(P<0.05); MG132干预细胞1h后再与TRAIL联合应用干预48h细胞生长抑制率明显增高(57.43%),与其它联合给药方式比较,差异具有统计学意义(P<0.05),且两药相互作用指数为1.42725,具有协同抑制细胞生长的作用。2.细胞形态学观察:倒置显微镜下可见阴性对照组肺癌细胞A549呈短梭形贴壁生长,TRAIL、MG132干预48h后,贴壁生长细胞减少,细胞变圆,呈皱福建医科大学2008级硕士研究生毕业论文缩甚至脱落等特征,两药联合干预后特征更明显;荧光显微镜下可见TRAIL、MG132作用后,细胞膜呈绿色荧光而细胞核呈微弱红色荧光,部分细胞核呈碎片状或梅花状等典型的细胞凋亡特征;TRAIL与MG132联合作用后,细胞凋亡特征明显增强。3.流式细胞仪检测结果显示:TRAIL与MG132联合应用干预48h后,肺癌细胞A549凋亡率为67.65%,与TRAIL(23.55%)、MG132(25.91%)单药组比较,细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。4.蛋白印迹结果显示:与TRAIL单药比较,两药联合应用干预肺癌细胞A549 48h,核转录因子NF-κB表达明显减弱(P<0.05),细胞凋亡相关蛋白caspase8、caspase9表达明显增强(P<0.05),差异有统计学意义。结论:1.TRAIL具有通过诱导细胞凋亡的方式抑制肺癌细胞A549生长的作用。2.蛋白酶体抑制剂MG132具有体外抑制肺癌细胞A549生长,促进凋亡的作用。3.TRAIL与MG132联合干预能明显增强肺癌细胞A549对TRAIL诱导凋亡的敏感性,有效提高细胞凋亡率。4.NF-κB在TRAIL诱导细胞凋亡的信号转导通路中发挥重要作用;TRAIL在诱导细胞凋亡过程中通过旁路途径激活NF-κB,导致肺癌细胞A549对TRAIL诱导凋亡的敏感性降低;TRAIL与MG132联合应用可以通过抑制NF-κB的激活,并促进凋亡相关蛋白caspase8、caspase9的表达而提高细胞凋亡率。