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视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的凋亡在多种视网膜变性类疾病的发病过程中起了重要作用,但由于细胞凋亡机制复杂,阻碍了临床对该类疾病的有效治疗,因此有必要进一步完善RPE细胞的凋亡机制。线粒体途径在RPE细胞凋亡中的重要作用已经得到了证实,本课题针对线粒体途径中由凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)介导的非依赖Caspase途径进行研究,完善RPE细胞的凋亡机制,并通过褪黑激素(Melatonin, MLT)的干预了解该途径在氧化应激诱导RPE细胞凋亡中的地位。目的研究体外氧化应激诱导RPE细胞凋亡模型中,AIF的表达变化,尤其是AIF从线粒体释放进入细胞质的转位变化,并通过MLT的干预,探讨AIF在RPE细胞凋亡中所占的地位,对线粒体途径在氧化应激诱导RPE细胞凋亡的机制进一步完善。方法使用过氧化氢(H2O2)建立体外氧化应激诱导RPE细胞凋亡模型,并进行Annexin V/PI流式细胞和甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)检测RPE细胞凋亡和增殖的变化,检测细胞内活性氧(reactive oxygen, ROS)的产生和线粒体膜电位的变化。通过免疫印迹( Western blot )、荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain raction)和免疫荧光法检测AIF在RPE细胞表达的变化,了解AIF介导的非Caspase途径是否参与了H2O2诱导的RPE细胞凋亡;通过观察加入MLT后RPE细胞ROS的产生、细胞凋亡率和AIF的表达变化,探讨AIF的地位。应用SPSS 10.0分析软件对定量结果进行数据分析。结果实验发现RPE细胞随着H2O2剂量增加和作用时间延长增殖受到显著抑制(GLM检验:F=14.06,P=0.0011),各实验组与空白对照组相比有显著差异(ANOVA检验:α=0.05水平),ROS产生增加,并以线粒体的产生为主,Rh123荧光强度随作用时间增加而增强(GLM:F=17.67、P=0.0031),细胞的凋亡率增加;AIF的表达明显增加,以细胞质内的增加为主,线粒体的表达增加不明显;进行MLT干预后发现ROS的产生受到了明显的抑制;RPE细胞的凋亡率MLT干预组与对照组相比明显下降(t检验:24h组T=8.9622,P=0.0009,48h组T=6.8792, P=0.0023);MLT干预后AIF的表达没有受到抑制,荧光定量PCR显示AIFmRNA的表达明显增加,线粒体和细胞质的蛋白表达量都明显增加。结论AIF介导的非Caspase依赖途径参与了氧化应激诱导的RPE细胞凋亡。通过MLT的干预发现MLT对AIF的产生和释放没有明显的抑制作用, MLT能够有效抑制氧化应激诱导的RPE细胞凋亡,因此推断AIF可能在氧化应激诱导RPE细胞凋亡过程中不占主要地位。