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猪链球菌病对养猪业发展造成极大危害,其中猪链球菌2型(SS2)为人畜共患传染病,严重威胁公共卫生安全。目前,预防和治疗猪链球菌病的主要方法是免疫接种和抗生素治疗,但是猪链球菌分群复杂,疫苗更新快,对抗生素容易产生耐药性并存在肉制品中的抗生素残留问题。卵黄抗体(IgY)不存在药物残留和耐药性的问题,是一种安全、高效、无公害的生物制品,可替代抗生素用于猪链球菌病的日常预防。本课题通过对猪链球菌2型(SS2)抗原活化扩培,制备免疫原,免疫健康临产鸡,从高免鸡蛋中提取特异性IgY,研究了IgY的热、酸碱、胃蛋白酶和胰蛋白酶稳定性以及亲和常数。为了提高IgY的耐胃酸及酶解稳定性,制备载IgY壳聚糖纳米微粒并优化条件,对微粒进行表征及体外释放性能研究。SS2免疫原制备与特异性IgY的制备。SS2菌种经显微镜镜检,活化扩培,菌落平板计数得菌体浓度为3.4×1010CFU/mL,煮沸灭活,获得SS2菌体抗原。菌体抗原与佐剂混合制成免疫原,免疫健康临产鸡,经4次免疫后,收集免疫后的高免鸡蛋(测得ELISA效价1:6400)。从高免鸡蛋中分离卵黄,采用水稀释冻融法、微滤、超滤、盐析、透析、亲和层析等纯化方法,得到IgY亲和层析样品,考马斯亮蓝G-250法检测得该IgY样品的蛋白质含量为81mg/mL,SDS-PAGE检测IgY纯度达到电泳纯,间接ELISA法检测IgY效价为1:6400。IgY的性质研究。应用间接ELESA和SDS-PAGE考察IgY对温度、酸碱、胃蛋白酶和胰蛋白酶稳定性以及亲和常数,结果表明:在温度低于60℃及pH3~10范围,IgY活性基本保持不变;在模拟胃液(SGF)中温育4h后,IgY的活性保留率仅为9.3%,表明IgY易被胃蛋白酶分解;在模拟肠液(SIF)中温育4h后,IgY的活性保留率超过90%,显示IgY对胰蛋白酶稳定;非竞争性ELISA法检测IgY样品的亲和常数为8.4×108L/mol。载IgY壳聚糖纳米微粒的制备、表征及体外释放性能检测。以三聚磷酸钠为交联剂,采用离子交联法制备载IgY壳聚糖纳米微粒,单因素试验结果表明,CS与TPP质量比在3:1~7:1的范围内时才能形成纳米微粒, IgY的初始浓度在0.5~3mg/mL范围内时,随着IgY初始浓度的增加纳米微粒的包封率降低而载药量提高。以IgY的包封率和载药量为考察指标,应用星点试验设计对壳聚糖溶液的质量浓度、壳聚糖与三聚磷酸钠质量比和IgY的质量浓度三个因素的各水平进行模型拟合和响应面分析,获得纳米微粒的最佳制备工艺:壳聚糖溶液的质量浓度0.23g/100mL,壳聚糖与三聚磷酸钠质量比3.93:1,IgY的质量浓度2.46mg/mL,包封率(93.26%)和载药量(25.64%)较高,微粒平均粒径为424nm,Zeta电位为26.20mV,经傅立叶红外光谱表征,发现该纳米微粒与IgY成功结合。在pH7.4的PBS中的持续释放时间达8d,在SGF和SIF中温育4h后的累计释放率超过了90%,表现出了良好的缓释性能。载IgY壳聚糖纳米微粒,不仅可以使IgY的口服稳定性增强,还可以使IgY的释放延缓至小肠环境中释放,提高生物利用度。本课题从SS2菌体抗原制备开始,完成了特异性IgY的分离纯化,研究了IgY的性质,IgY抗体具有较高的亲和常数,可用于SS2病的免疫预防中。采用响应面法优化载IgY壳聚糖纳米微粒的制备工艺,体外释放性能研究结果表明,载IgY壳聚糖纳米微粒具有良好的缓释性能,因此,口服IgY在预防和治疗猪链球菌病方面,将具有广阔的应用前景。