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犬瘟热(Canine Distemper，CD)是由犬瘟热病毒(CDV)感染引起的一种急性、高度接触性传染性疾病，是我国当前对养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的疫病之一。常规弱毒疫苗虽然在CD防控中发挥了非常重要的作用，但是也存在诸多缺点。为了研究新一代安全、高效的CD基因工程疫苗，本研究对CDV南京分离株(CDV-NJ15)核衣壳蛋白(N)基因进行了克隆、序列分析，分别构建了N基因的原核表达载体和真核表达载体，对表达产物的免疫原性进行了初步研究，并进行了小鼠的DNA免疫试验，测定重组质粒诱导的抗体效价。 根据GenBank上发表的CDV毒株序列设计一对跨越N基因编码区的引物，采用RT-PCR方法扩增CDV-NJ15 N基因，并将其插入到pMD 18-T中，构建克隆载体pMD-N。经序列测定，克隆的N基因长1572bp，编码523个氨基酸。比较GenBank中收录的其它CDV毒株序列，发现它与Onderstepoort疫苗株和Convac疫苗株的核苷酸同源性均为99.7％，氨基酸同源性为99.4％。与其他分离株的核苷酸同源性94.0～95.1％，氨基酸同源性为97.5～98.3％。推测CDV-NJ15是CDV疫苗株的变异株。 以CDV-NJ15为模板，设计两对引物，分段扩增得到了N基因上下游的981bp和702bp两个片段，将其分别T-A克隆到pMD 18-T载体后，再亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中，然后将重组质粒转化进宿主菌BL21中，在37℃1mM IPTG诱导下两个片段均获得良好的表达。经SDS-PAGE鉴定，其表达的融合蛋白约56.1和44.8kD，与预期值一致。免疫转印试验显示，两个重组蛋白均可被CDV Onderstepoort株兔抗血清识别，表明该重组蛋白具备天然N蛋白的部分抗原性。为探索更为敏感的诊断方法和研制CDV新型疫苗创造条件。 对克隆载体pMD-N进行双酶切，将得到的CDV-NJ15 N基因定向克隆到pcDNA3.1(-)真核表达载体中，通过磷酸钙介导转染COS-7细胞，用SDS-PAGE和Westem-blot分别鉴定表达产物的相对分子量及其免疫原性。结果证明获得正向插入的pcDNA-N重组表达质粒，表达产物的相对分子量约58.2kD，与预期值大小一致，且该表达产物能够被CDV-Onderstepoort株的兔抗血清识别，表明构建的pcDNA-N重组质粒能在哺乳动物细胞中表达并且具有抗原性。以构建好的CDV N和H基因真核表达载体pcDNA-N和pcDNA-H为基因疫苗，分组免疫6周龄昆明系小鼠，以2周为间隔，共免疫4次，最后一次免疫3周后眼眶采血分离血清。酶联免疫吸附试验(ELISA)