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背景与目的:原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤的一种,治疗效果差,每年新增患病人数高达60万例。其起病隐匿且潜伏期长,多数患者发现时已为中晚期,故生存预后差。目前临床上迫切地需要开发有效的治疗方法。甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种来源于胚胎内胚层组织细胞的糖蛋白,是一种胚胎性肿瘤相关蛋白。在大多数肝癌患者血清中呈高表达,除了肝癌,胃癌、胰腺癌和生殖系统的恶性肿瘤也通常伴有小剂量的甲胎蛋白升高。目前已被普遍作为一种辅助肝癌诊断及预测肝癌复发的肿瘤标记物。近年来,关于甲胎蛋白越来越多的研究表明,甲胎蛋白在肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭等过程中发挥着广泛的作用,我们本课题的目的就是观察甲胎蛋白(AFP)基因沉默对肝癌细胞迁移黏附能力的影响,并探讨其作用机制。方法:在我们的方法中首先构建p Silencer3.0-H1-AFP质粒,脂质体转染法转染肝癌细胞系EGHC-9901,实验中将转染后的肝癌细胞系EGHC-9901分为3组,实验组(转染p Silencer3.0-H1-AFP质粒)、载体对照组(转染空载体的细胞组)、空白对照组(未做处理的细胞组)。之后我们采用Transwell小室实验检测实验中三组细胞的趋化迁移能力,采用细胞聚集实验来分析实验中三组肝癌细胞与细胞之间的同质黏附能力,我们采用层黏连蛋白粘附实验分析了三组细胞与基质之间的异质粘附能力,最后我们为了探讨细胞粘附能力改变的机制,采用Western blotting法检测各组细胞粘附分子E-钙黏蛋白、CD44V6、整合素α5、α-连环素、β-连环素、整合素β1、CD15表达量。结果:1、实验组每个镜下穿膜细胞数为(132±16)个、载体对照组每个镜下穿膜细胞数为(335±21)个、空白对照组每个镜下穿膜细胞数为(371±32)个,经统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比较,P<0.05。2、振摇时间为20 min时,实验组细胞聚集指数(AI)为0.263±0.010、载体对照组细胞聚集指数(AI)为0.216±0.013、空白对照组细胞聚集指数(AI)为0.220±0.009,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05。振摇时间为40min时,实验组细胞聚集指数(AI)为0.530±0.020、载体对照组细胞聚集指数(AI)为0.223±0.017、空白对照组细胞聚集指数(AI)为0.240±0.012,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05。振摇时间60min时,实验组细胞聚集指数(AI)为0.632±0.031、载体对照组细胞聚集指数(AI)为0.322±0.021、空白对照组细胞聚集指数(AI)为0.376±0.019,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05。3、培养30 min时,实验组吸光度(OD)值为0.225±0.014、载体对照组吸光度(OD)值为0.223±0.018、空白对照组吸光度(OD)值为0.267±0.020,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05。培养60min时,实验组吸光度(OD)值为0.157±0.008、载体对照组吸光度(OD)值为0.347±0.026、空白对照组吸光度(OD)值为0.363±0.039,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05;培养90min时,实验组吸光度(OD)值为0.139±0.010、载体对照组吸光度(OD)值为0.467±0.023、空白对照组吸光度(OD)值为0.503±0.045,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05。4、实验组整合素β1蛋白表达量为0.337、载体对照组整合素β1蛋白表达量为0.078、空白对照组整合素β1蛋白表达量为0.051,统计学分析结果表明实验组分别与与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05;实验组CD15蛋白表达量为0.221、载体对照组CD15蛋白表达量为0.629、空表对照组CD15蛋白表达量为0.631,统计学分析结果表明实验组与载体对照组、空白对照组相比,P<0.05。实验组E-钙黏蛋白表达量为0.883、载体对照组E-钙黏蛋白表达量为0.896、空白对照组E-钙黏蛋白表达量为0.873,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05;实验组CD44V6表达量为0.672、载体对照组CD44V6表达量为0.596、空白对照组CD44V6表达量为0.678,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05;实验组整合素α5表达量为0.433、载体对照组整合素α5表达量为0.392、空白对照组整合素α5表达量为0.403,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05;实验组α-连环素表达量为0.368,、载体对照组α-连环素表达量为0.401、空白对照组α-连环素表达量为0.413,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05;实验组β-连环素表达量为0.563、载体对照组β-连环素表达量为0.492、空白对照组β-连环素表达量为0.513,统计学分析结果表明实验组分别与载体对照组、空白对照组相比,P>0.05。结论:在体外沉默AFP基因可能会抑制肝癌细胞趋化迁移能力,促进肝癌细胞与细胞之间的同质黏附能力,抑制肝癌细胞与其他器官或组织的异质黏附能力。发生这种改变的原因可能是沉默AFP基因在肝癌细胞中的表达后,导致了整合素β1表达上调、CD15表达下调。本实验对沉默甲胎蛋白基因后肝癌细胞系EGHC-9901迁移黏附能力及机制的研究,将有助于深入认识甲胎蛋白在肝癌的侵袭转移中的作用。