发酵银杏叶制备新型生物饲料添加剂的研究

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银杏叶富含黄酮类、有机酸、甾类、多糖、氨基酸和微量元素等多种活性物质,这些活性物质可不同程度地影响动物机体的代谢,发挥一定的营养促生长及防病抗病作用,在动物饲料添加剂的应用中具有广阔的发展前景。另一方面,从银杏叶中提取黄酮类和萜类化合物后产生大量的废渣,绝大部分作为废弃物丢弃或焚烧,既造成环境污染,又浪费了银杏叶渣中残留的活性资源。本论文分别以银杏叶和银杏叶渣作为主要的发酵基质,利用微生物固态发酵技术制备新型的生物饲料添加剂。主要结论如下:以银杏叶为主要的固态发酵基质,分别以地衣芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌为菌种,在单因素实验的基础上分别对发酵条件进行7因素3水平的正交试验。结果表明,地衣芽孢杆菌的适宜发酵条件为:葡萄糖1.5%(w/v),尿素1.5%(w/v),接种量10%,液固比为1.2:1,初始pH7.0,发酵温度37℃,发酵时间48h;纳豆芽孢杆菌的适宜发酵条件为:葡萄糖1.5%,尿素1.5%,接种量10%,液固比为1.2:1,初始pH7.0,发酵温度37℃,发酵时间48h。地衣芽孢杆菌发酵培养物的黄酮含量比发酵前提高了16.7%,总氨基酸含量比发酵前提高了17.22%,活菌数达2.189×1010个/g,芽孢形成率为82.7%,蛋白酶活为1307U/g,粗蛋白含量比发酵前提高了43.83%,香气物质含量比发酵前提高了98.68%。纳豆芽孢杆菌发酵培养物的黄酮含量比发酵前提高了10.6%,总氨基酸含量比发酵前提高了31.05%,活菌数达2.84×1010个/g,芽孢形成率为84.2%,蛋白酶活为1510U/g,粗蛋白含量比发酵前提高了58.74%,香气物质提高了95.26%。通过生物发酵和转化,两种发酵产品,不仅富含益生菌,有效提高了黄酮类化合物的提取得率,以及粗蛋白和氨基酸的含量,而且明显提高了银杏叶饲料添加剂的适口性。以银杏叶作为主要的固态发酵基质,以地衣芽孢杆菌与纳豆芽孢杆菌作为菌种进行双菌株混合发酵。分别对液固比、初始pH、接种量、菌种比和发酵时间进行了单因素优化实验,获得适宜的固态发酵条件为:液固比为1.2:1,初始pH7.0,接种量15%,种子中地衣芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌组成为1.5:1(V/V),发酵时间5d。发酵培养物中活菌数达12.02×107个/g,蛋白酶活为995U/g。以银杏叶渣为主要的固态发酵基质,以产朊假丝酵母和黑曲霉为菌种,进行双菌株混合发酵。在单因素实验的基础上分别对发酵条件进行7因素3水平的正交试验,结果表明,适宜发酵条件为:葡萄糖2%(w/v),尿素3%(w/v),接种量15%,液固比为1.1:1,初始pH5.0,发酵温度28℃,发酵时间4d。在此条件下,酵母、黑曲霉发酵培养物中,酵母活菌数达3.385×109/g,木聚糖酶活为87886U/g,纤维素酶活为6465U/g,氨基酸含量比发酵前提高了95.44%,粗蛋白含量比发酵前提高了154.24%,黄酮含量及香气物质含量比发酵前分别提高了96.97%和98.45%。通过生物发酵和转化,显著提高了银杏叶提取渣的生物活性、营养价值、适口性,拓宽了银杏叶高效高值利用的新途径。以银杏叶渣为主要的固态发酵基质,以地衣芽孢杆菌与纳豆芽孢杆菌为发酵菌种进行双菌株混合发酵。分别对液固比、初始pH、接种量、菌种比和发酵时间进行单因素优化实验,获得的适宜固态发酵条件为:液固比为1.2:1、初始pH7.0、接种量15%、种子中地衣芽孢杆菌和纳豆芽孢杆菌组成为1.5:1(V/V)、发酵时间5d。发酵培养物中,活菌数达5.62×107个/g,蛋白酶活为816U/g。以银杏叶渣作为青贮原料,分别对含水量、乳酸菌添加量、葡萄糖添加量和青贮时间进行单因素优化实验。适宜的青贮工艺为:含水量50%,乳酸菌添加量4.5g/kg,葡萄糖添加量20g/kg,青贮时间12d。在此条件下,青贮后样品中的黄酮含量达到6.5mg/g鲜重,比青贮前的3.1mg/g鲜重提高了109.7%,乳酸含量达到404μg/g鲜重,酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维含量分别为48%、56%,分别比青贮前降低了18.6%和11.1%。结果表明,通过青贮可以明显提高银杏叶渣中黄酮类物质的溶出率,可以有效降低植物中纤维素含量,从而有利于提高动物对活性成分的利用度,以及动物对植物性饲料的消化率。以银杏叶作为青贮原料,分别对含水量、乳酸菌添加量、葡萄糖添加量和青贮时间进行单因素优化实验。适宜的青贮工艺为:含水量60%,乳酸菌添加量5.5g/kg,葡萄糖添加量20g/kg,青贮时间14d。在此条件下,青贮后样品中的黄酮含量达到8.9mg/g鲜重,比青贮前的4.2mg/g鲜重提高了111.90%,乳酸含量达到652μg/g鲜重,酸性洗涤纤维、中性洗涤纤维含量分别为33%、45%,分别比青贮前降低了19.5%和15.1%。结果表明,通过青贮可以明显提高银杏叶中黄酮类物质的溶出率,可以有效降低植物中纤维素含量,从而有利于提高动物对活性成分的利用度,以及动物对植物性饲料的消化率。肉鸡日粮中添加0.3%-0.6%的地衣芽孢杆菌或纳豆芽孢杆菌银杏叶发酵物,均能在一定程度上改善肉鸡的饲料效率(21-42d及1-42d)、促进胸腺(21d和42d)和脾脏(21d)的发育;均能在一定程度上改善肉鸡的抗氧化功能以及肉鸡胸肌的吸收力和嫩度,其中纳豆芽孢杆菌略优于地衣芽孢杆菌。
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