目的:本实验通过乙醇梯度灌胃的方法建立酒精性肝病(ALD)大鼠模型,并使用化浊解毒汤给大鼠灌胃,观察化浊解毒汤对酒精性肝病肝损伤大鼠NF-κB表达及ALT、AST、CAT、LN、IV-C、PCⅢ、HA、TNF-α等水平的影响,结合肝组织病理学检查研究化浊解毒法在治疗酒精性肝损伤中的作用,探讨NF-κB在ALD发病过程中所起的作用,为应用化浊解毒法防治本病提供理论依据。方法:健康雄性Wistar大鼠50只,体重180±20g,正常饮食驯化一周后随机抽取10只作为正常组(正常饮食,给予生理盐水2.0ml/只,日三次灌胃,共12w)。其余40只采用综合造模方法制造大鼠酒精性肝病的动物模型。每日清晨白酒灌胃1次(红星牌二锅头56°,北京酿酒总厂),最初将白酒稀释成1%、3%、5%、8%,4种浓度由低到高,每日灌胃2ml,各3d。第13天开始,按白酒剂量5g/(kg.次)灌胃,以后每10d根据大鼠体重、活动以及反应情况增加灌酒剂量1次,最终白酒灌胃剂量达到8g/(kg.次)连续8周,灌胃同时灌服玉米油1 ml/只/天。造模成功后随机分为:模型组(MD)、甘利欣组(diammonium glycyrrihizinate,DG)、化浊解毒汤高剂量组(HZG)、化浊解毒汤低剂量组(HZD)。各组均普通颗粒饲料喂养,自由饮水和进食,分笼饲养于22±2℃,湿度70%±5%清洁级动物实验室内。于24周末采用股静脉放血法,留取血清进行以下项目测定:谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。放射免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、III型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、IV型胶原(IV-C)、过氧化氢酶(CAT);另以10%甲醛固定,常规包埋、切片,进行苏木精-伊红(HE)染色,观察肝脏组织基本病理改变。用免疫组织化学染色观察肝脏NF-κB的表达水平。计量资料以均数±标准差(X—±S)表示,采用方差分析,计数资料采用秩和检验,均以SPSS 11.5统计软件分析。结果:1一般情况:造模组8只大鼠死亡,正常对照组均存活。存活大鼠初始体重各组相比没有显著性差异。一般表现:正常对照组大鼠,食欲佳,被毛光滑,精神状态好,体重增加。模型组大鼠精神萎靡,活动减少,食欲减退,消瘦,皮毛无光泽,体重较前有所下降。治疗各组大鼠精神、食欲及活动介于正常组与模型组之间。2大鼠血清生化指标测定结果:与正常组比较,模型组大鼠血清AST、ALT、PCⅢ、IV-C、HA、LN、TNF-α含量显著增加(P<0.01),CAT含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠血清AST、ALT、PCⅢ、IV-C、HA、LN、TNF-α含量降低均有显著性差异(P<0.01),CAT含量明显升高(P<0.01);西药组、化浊解毒汤低剂量组之间无显著性差异(P>0.05);化浊解毒汤高剂量组与西药组有显著差异(P<0.01)。3肝脏病理学变化:肉眼观察,正常大鼠肝脏被膜光滑,质地柔软,呈红褐色。模型组大鼠肝脏体积明显增大,质地较正常组硬,色泽较暗淡,呈浅黄色或土黄色,可见局灶性黄白色变性灶,切面油腻。治疗组介于正常组与模型组之间。光镜下,肝脏切片显示造模组大鼠,肝小叶组织出现不同程度空泡变性,肝小叶的坏死灶及肝窦内可见较多量多核细胞、淋巴细胞及单核细胞浸润,肝细胞肿胀呈气球样变,细胞内充满大小不一的脂滴,胞质疏松其内可见大小不等、数量不一的脂肪空泡,细胞核被挤向一边,肝细胞的脂肪变性以肝小叶中央区最为明显,肝细胞呈点片状坏死,还可见肝汇管区的小动静脉、肝小叶中央静脉、肝窦有血液淤滞及血栓现象。中药治疗组和西药对照组与造模组相比均有不同程度的改善和恢复。4肝组织NF-κB免疫组化染色结果:NF-κB的阳性表达主要位于肝脏中央静脉周围细胞的胞浆和细胞核中。正常组NF-κB基本不表达;模型组大鼠肝组织内NF-κB阳性表达的肝细胞数明显多于对照组,不仅胞浆有表达,大多数胞核内也有明显棕黄色颗粒样改变;治疗各组NF-κB的表达减弱,其中以中药高剂量组减弱最为显著,24周末NF-κB的表达接近正常组。结论:1采用逐渐增加乙醇浓度给大鼠灌胃的方法成功复制了ALD大鼠模型,其病理变化反应了临床酒精性肝病(如:脂肪堆积、炎症、纤维化)。2免疫组化结果证实,NF-κB在ALD的病理生理过程中起重要作用,本实验中参与了ALD大鼠的肝损伤过程且参与调控细胞因子、炎症因子等的基因表达。3化浊解毒方药能够抑制酒精性肝病时NF-κB、TNF-α的表达,改善肝功能和肝纤维化指标,因此,以浊毒立论治疗ALD具有实用性和可行性。