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目的：
通过建立大鼠肝脏缺血预处理延迟效应和肝脏缺血再灌注损伤的动物模型,比较两组间血清转氨酶的变化情况,并分析解偶联蛋白2(UCP2)在缺血预处理延迟效应及缺血再灌注损伤大鼠肝脏组织中的表达情况,以探讨UCP2在肝脏缺血再灌注损伤中的作用。
材料与方法：
选取Wistar雄性大鼠40只,体重为220～270g,随机分为缺血预处理(IP)组及缺血再灌注损伤(IR)组,每组20只大鼠:①缺血预处理组,在10％水合氯醛麻醉下行开腹,先夹闭70％肝脏血流10min,恢复血供后关腹,72h后再次开腹,与前次夹闭同一部位夹闭肝脏血流30min,恢复血供后关腹,分别于30min阻断前(IP0),再灌注后1h(IP1),6h(IP6)及24h(IP24)4个时点取材,每个时点5只大鼠;②缺血再灌注损伤组,先行开关腹操作,72h后再次开腹夹闭70％肝脏血流30min,恢复血供后关腹,分别于30min阻断前(IP0),再灌注后1h(IP1),6h(IP6)及24h(IP24)4个时点取材,每个时点5只大鼠。取材时,抽取腹主动脉血,离心后取血清,通过自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)水平;取部分肝组织于4％多聚甲醛中固定,另取部分肝组织于-80℃保存,分别通过免疫组织化学SABC法及Western Blot法检测肝组织中UCP2的表达位置和表达量的变化情况。
结果
1、血清转氨酶检测结果:30min阻断前和再灌注后1h,6h及24h,IP组ALT数值分别为26.0±1.6U/L,222.2±180.1U/L,303.2±179.3U/L,90.8±72.3U/L。AST数值分别为76.0±8.4U/L,514.0±352.1U/L,810.8±577.9U/L,275.2±178.7±U/L;IR组ALT数值分别为22.6±3.9U/L,377.8±195.9U/L,993.4±607.5U/L,62.4±58.1.AST数值分别为60.2±14.3U/L,664.2±202.0U/L,2172.4±1171.0U/L,189.8±103.5U/L。两组转氨酶指标的变化趋势相同,再灌注后的转氨酶水平较30min阻断前均有明显升高,再灌注6h时转氨酶指标达峰值,明显高于其他各时点(P＜0.05),再灌注24h时基本接近正常水平。两组间比较,在再灌注6h时,IP组ALT水平明显低于IR组(P＜0.05),AST水平也有低于IR组的趋势,但无统计学差异。其余时点两组间均无统计学差异。
2、免疫组织化学检测结果显示:缺血再灌注后,UCP2的蛋白主要表达于肝脏实质细胞的细胞浆中。
3、Western Blot检测结果:30min阻断前和再灌注后1h,6h及24h,IP组UCP2灰度值比值分别为:0.2358±0.0296,0.3886±0.0127,0.2672±0.0021,0.7829±0.0296;IR组则分别为0.1079±0.0222,0.3565±0.0610,0.3506±0.0260,0.9939±0.0186。两组间进行比较,IP0高于IR0,P＜0.05;IP1与IR1之间无明显差异;IP6低于IR6,P＜0.05;IP24低于IR24,P＜0.05。同组间进行比较,IP1高于IP0,P＜0.05;IP6低于IP1,P＜0.05;IP6与IP0无明显差异;IP24分别高于IP6和IP1,P＜0.05;IR1高于IR0,P＜0.05;IR6与IR1无明显差异;IR24分别高于IR6和IR1,P＜0.05。
结论
1、缺血预处理可诱导肝组织UCP2的表达,可能是缺血预处理延迟效应保护肝脏缺血再灌注损伤的重要机制之一。
2、UCP2也可作为反映肝脏应激强度的一个指标。