华支睾吸虫成虫与胆管癌细胞相互作用蛋白的筛选

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华支睾吸虫(Clonorchis sinensis,Cs)又称东方肝吸虫,是一种危害非常严重的鱼源性寄生虫,它不但给渔业生产造成了巨大的经济损失,而且对人类身体健康也构成了极大的威胁。近年来,越来越多的实验和流行病学数据证明华支睾吸虫的感染与胆管癌的发生存在着病因学联系,世界卫生组织下属国际癌症研究署已于2009年将华支睾吸虫列为了第Ⅰ类致癌物质,成为11种Ⅰ类致癌病原生物的一员。尽管有众多的证据证明华支睾吸虫的致癌作用,然而对于华支睾吸虫诱发胆管癌的发病机制仍然不是很清楚,其中该吸虫排泄/分泌代谢产物(ES)对宿主的作用被认为是最主要的直接性因素,它们除了具有较高的免疫原性,能引起宿主免疫反应外,还可能会对宿主细胞直接施加毒性或者与其相互作用。为了进一步验证它们所发挥的作用,我们收集了这些代谢产物,并将其分别作用于胆管癌和肝癌细胞,利用CCK-8法检测和分析了不同浓度ES及不同作用时间对两种细胞增殖的影响,结果表明该吸虫代谢产物对两种细胞的增殖具有明显的促进作用,从而进一步证实了这些代谢中可能存在某些促细胞增殖的相关因子。为了寻找华支睾吸虫成虫与胆管癌细胞相互作用的蛋白,本研究构建了华支睾吸虫成虫T7噬菌体展示cDNA文库,并利用全细胞淘洗的方法对文库进行了筛选,将筛选得到的噬菌体进行体外扩增,随后提取其基因组DNA,并进行了测序和序列分析。最终获得了6种细胞互作阳性克隆噬菌体。希望通过该方法筛选获得与胆管癌细胞相互作用的多肽或蛋白,为进一步确定华支睾吸虫成虫排泄/分泌代谢产物中促细胞增殖的有效成分和相关机制的研究奠定基础。
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