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幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)简称Hp,是一种微需氧革兰氏阴性杆菌。研究证实幽门螺杆菌与慢性胃炎、胃十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤以及胃癌有密切的关系。因此根除幽门螺杆菌显得愈发重要。铋制剂已经广泛应用于治疗Hp相关的消化性溃疡及胃十二指肠溃疡等,但铋制剂在应用过程中具有潜在的毒性与不安全性,如何发挥铋制剂治疗胃肠病和根除幽门螺杆菌感染的优势,减少其毒副作用,研究开发疗效更好、毒性更小的铋制剂是目前急需解决的问题。猴头菇(Hericium erinaceus)属担子菌纲、多孔菌目、齿菌科、猴头属,是一种药食两用真菌,含有丰富的蛋白质、脂肪、纤维素、多糖、氨基酸等,其中猴头菇多糖是重要的活性成分。大量研究表明,猴头菇多糖具有保护并修复胃黏膜、提高免疫力、抗肿瘤、降血糖、抗突变等药理活性,具有较好的研究和应用前景。 本文利用猴头菇多糖作为铋的载体,制备一种新型的猴头菇多糖铋剂,使其铋含量低于目前临床上普遍应用的铋剂,减少铋的毒副作用;同时使其具有较强的抑制幽门螺杆菌活性,为高效低毒的新型铋剂的研究与开发提供基础,该研究对人类健康和社会经济发展具有重要意义。本文主要研究内容如下: 1、猴头菇子实体的成分分析。采用国标法对猴头菇子实体进行基本成分分析。结果表明,猴头菇中水分含量为4.67%,粗蛋白含量为24.27%,粗脂肪含量为2.82%,总糖含量为48.35%,灰分为7.35%。可见,猴头菇中总糖含量最为丰富,值得深入研究。 2、猴头菇多糖酶法提取工艺研究。本文采用正交和响应面分析法优化复合酶法提取猴头菇多糖(HEP)工艺,最优提取工艺:pH值为5.71,温度为52.03℃,时间为33.79 min,复合酶(纤维素酶∶果胶酶∶胰蛋白酶=2∶2∶1)用量为3%。在此条件下,猴头菇多糖得率为13.46±0.37%,多糖含量为44.19±1.64%。而常规热水浸提猴头菇多糖多糖得率为8.03±0.26%,含量为40.09±1.59%。可见,复合酶法提取比常规热水浸提猴头菇多糖得率提高67.72%,该法简单快捷且多糖得率高,在猴头菇多糖的提取方面具有较好的应用前景。 3、猴头菇多糖的初步表征及其抗氧化活性研究。采用FT-IR、CD、SEM、AFM和GC对常规热水浸提法和复合酶法提取的猴头菇多糖结构进行初步表征。研究表明,不同提取方法得到的猴头菇多糖主要官能团基本相似,但立体构象和对称性发生改变。复合酶法提取猴头菇多糖分子间相互缠绕,呈规则团聚状,且复合酶对猴头菇破壁效果明显。常规热水浸提法和复合酶法提取的猴头菇多糖均由甘露糖,葡萄糖,木糖和半乳糖组成,其摩尔比分别为11.99∶6.48∶2.6∶1和15.16∶5.55∶4.21∶1。比较不同提取方法猴头菇多糖的抗氧化活性进行研究,研究表明两种不同提取方法获得猴头菇多糖对·OH和DPPH·均有一定的清除作用。 4、猴头菇多糖铋的制备和表征。以不同分子量的猴头菇多糖与Bi(NO3)3为原料,制备一种新型猴头菇多糖铋剂(BiHEP)。采用元素分析、FT-IR、CD、SEM、AFM、XRD和TG对其结构进行表征。研究表明,高分子量与低分子量猴头菇多糖与铋形成的配合物中的铋含量没有明显的差别,分别为25.65%和25.71%,且均低于临床常用的枸橼酸铋钾(CBS)中的铋含量(CBS中铋含量为37.5%)。猴头菇多糖链中-COO-和-OH参与Bi3+的配位。多糖铋配合物的形成,导致多糖链的构象发生了变化,改变了多糖的柔顺性及内部结构,使Bi3+在糖链上高度分散,两者的热化学性质有明显差别。 5、猴头菇多糖铋抑制幽门螺杆菌活性研究。采用琼脂稀释法对猴头菇多糖和猴头菇多糖铋的最小抑菌浓度(MIC)进行了测定。研究结果表明,猴头菇多糖铋表现出很好的抗Hp活性,BiHEP对Hp国际标准株NTCC11637的MIC值与CBS相同均为20μg/mL,但BiHEP铋含量大大低于CBS中的铋含量,其以铋含量计算的MIC值分别为5.13μg/mL和7.5μg/mL。可见,BiHEP为一具有很好研究、开发及应用前景的新型铋剂,具有重要的研究和应用价值。