本文以重组抗RANKL人源化单克隆抗体为受试品,建立不同的检测方法,研究其在食蟹猴体内的药代动力学、组织分布与排泄、药效和产生抗药抗体的特征,了解受试品在体内的动态变化,为进一步深入阐明药物作用机制、药效和毒理学研究以及临床给药试验设计提供依据。1、建立灵敏、特异的酶联免疫吸附法（ELISA）用于检测血清中受试品的浓度,方法学验证结果满足生物样品定量分析方法验证指导原则的要求;药代动力学研究以食蟹猴为受试动物,实验分为4组,单次皮下注射低（0.5 mg·kg-1）、中（3 mg·kg-1）、高（18 mg·kg-1）剂量组和单次静脉注射中（3 mg·kg-1）剂量组;血样中的受试品采用经验证的ELISA法检测,血药浓度用非房室模型计算药代动力学参数;结果显示:食蟹猴皮下注射0.5、3、18 mg·kg-1后达峰浓度（Cmax）分别为（7.57±0.872）、（37.9±6.72）、（250±35.5）μg·mL-1,暴露水平（AUC（0-t））分别为（1630±496）、（8810±3800）、（94700±34900）hr·μg·mL-1,药物暴露水平随剂量增加而增加;静脉注射3 mg·kg-1受试品后,Cmax为（87.2±13.8）μg·mL-1;AUC（0-t）为（12000±4370）hr·μg·mL-1。2、建立放射性核素示踪法结合三氯醋酸（TCA）沉淀和分子排阻高效液相色谱法研究受试品在食蟹猴体内的组织分布与排泄特征,经测试,受试品在核素示踪标记后,活性未发生改变,可用于检测受试品在食蟹猴体内的组织分布与排泄;结果显示:食蟹猴皮下注射碘标记的受试品后,药物主要分布在肺、肝、脾、心和肾中;给药后28天,代谢产物经尿排出79.5%±14.6%,经粪排出6.83%±2.18%。3、采用灵敏特异的ELISA试剂盒,检测血清中骨转换标志物抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAcP 5b）、骨碱性磷酸酶（BAP）和I型胶原交联C末端肽（CTX-I）浓度水平,研究受试品在食蟹猴体内的药效作用;结果显示:给药后,血清中TRAcP 5b、BAP和CTX-I的浓度在1d或7d开始下降;表明上述生物标志物可以作为药效评价的指标。4、建立桥式酶联免疫吸附分析法（Bridging-ELISA）检测血清中的抗药性抗体,其验证结果符合2019年美国食品药品家督管理局（FDA）免疫原性方法学要求;通过对单次皮下注射给药溶媒对照组（0 mg·kg-1）、低剂量组（20 mg·kg-1）和高剂量组（100 mg·kg-1）采集的生物样品进行抗药抗体分析;结果显示:溶媒对照组和低剂量给药组均未检测到抗药性抗体,高剂量组有1只个体检测到抗药性抗体;提示受试品在食蟹猴体内存在免疫原性,抗药抗体的产生可能会对药效产生影响以及产生过敏反应。