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背景: 神经内分泌肿瘤(Neuroendocrine Neoplasm,NEN)是一组起源于神经内分泌细胞,能产生5-羟色胺代谢产物或多肽激素的实体肿瘤。消化系统是NEN的最好发部位,胰腺神经内分泌肿瘤pNETs是NET的一种。在我国胰腺是GEP-NET(Gastroenteropancreatic NET)最常见的原发部位,约占 49%。pNETs 根据有无激素分泌和相应临床表现,分为功能性pNET和无功能pNET。尽管pNETs是罕见的肿瘤,但其发病率近年来迅速增加至约每年1/100000。在根治性切除的pNETs患者中,预后比较好,但是这类患者术后的生存时间差异很大,很大程度上取决于肿瘤的生物学特征。了解 pNETs 者预后相关因素为pNETs患者提供最好的诊治方案。 肝脏激酶B1(LKB1)也称为STK11,在人体组织中广泛表达。LKB1是一种高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶,直接磷酸化AMPK(AMP-激活的激酶)家族中14个激酶活化环的苏氨酸残基,多与细胞代谢,增殖和极性偶联相关。LKB1在很多肿瘤中被证实为肿瘤抑制因子,包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、宫颈癌和肝细胞癌等。目前,LKB1 在 pNETs 中的表达和临床意义,在国内外尚且没有相关研究。在本研究中,我们旨在探讨pNETs基因表达模式和评价LKB1表达水平与预后之间的关系。探索LKB1过表达对胰腺神经内分泌肿瘤细胞生物学行为的调控作用。对于加深我们对 pNETs 分子机理的认识及寻找新的诊断或治疗靶点具有十分重要的意义。 目的: 1. 探讨胰腺神经内分泌肿瘤(PNET)基因表达模式和评价 LKB1 表达与预后之间的关系。 2. 探索LKB1对胰腺神经内分泌肿瘤细胞生物学行为的调控作用。 方法: 我们回顾性分析了广东省人民医院71例接受根治性手术切除的pNET患者的临床病理资料。通过定量实时逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)分别评估24例患者的肿瘤组织和配对的非肿瘤组织中LKB1的mRNA和蛋白质水平,用免疫组织化学技术(IHC)来检测 71例患者肿瘤组织中LKB1的表达水平,并根据IHC 结果将患者分为LKB1高表达组与LKB1低表达组两组,通过卡方检验和Students t检验评估LKB1表达与临床病理特征之间的关系。 通过Kaplan-Meier生存曲线和对数秩检验(Log-rank test)分析LKB1表达水平与患者预后指标的关系,包括患者的总生存期(OS)和无病生存期(DFS)。通过慢病毒感染构建LKB1过表达的pNET细胞系BON-1细胞,用qRT-PCR 、Western blot验证转染效果。以CCK8、Transwell实验分别检测LKB1过表达对BON-1细胞增殖、迁移、侵袭的能力的影响,通过Western blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白和 N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达情况。 结果: 与邻近正常组织相比,肿瘤组织中LKB1 mRNA水平和蛋白表达水平均显著降低。71例PNET患者中有52例(73.2%)LKB1蛋白呈阳性,表现为弥漫染色或部分染色,染色主要位于细胞质。LKB1低表达与年龄较大(P=0.042),Ki-67指数升高(P=0.004),有丝分裂计数增加(P = 0.001)和晚期组织学分级(P= 0.001)有关。 此外,LKB1表达低/负的患者比高表达患者的OS和DFS更短。实验表明LKB1过表达对胰腺神经内分泌肿瘤细胞BON-1的增殖、迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。LKB1 过表达可以增加上皮间质转化相关蛋白E-钙黏蛋白表达,而降低N-钙黏蛋白、波形蛋白的表达。 结论: 1. 我们的研究结果表明,LKB1可能是指示接受根治性切除的pNETs患者复发和生存的预后指标。 2. LKB1 可以抑制人胰腺神经内分泌肿瘤细胞的增殖,迁移和侵袭。 3. LKB1可能参与调控pNETs的上皮间质转化。