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乳腺癌(breast cancer)是乳房组织的恶性肿瘤,其病程进展快,病灶易发生转移,而转移灶引起的并发症为其致死的主因。我国每年约有20万例新增患者,其发病率与死亡率逐年上升,尽管乳腺癌通过手术治疗、化疗、放疗及内分泌和分子靶向治疗等手段有效地治愈了临床原位癌,但对于已发生远处转移乳腺癌患者的总体治疗效果及预后仍然欠佳,乳腺癌细胞可经血液或淋巴道途径发生肺、胸膜、骨、肝及脑转移等,患者发生远处器官转移是其致死的主要原因之一。大量研究表明,miRNA对于乳腺癌的发生、发展和扩散转移具有重要调节作用,深入研究乳腺癌发生发展的分子机制,是寻找治疗对策的关键。miR-17-92 cluster是目前研究最广泛的miRNA之一,miR-17-92 cluster的功能涉及正常发育、肿瘤发生、免疫疾病、心血管疾病及神经变性疾病等。miR-17-92 cluster位于小鼠14号染色体,人的染色体13q13-q32。它包括6个独立成员:miR-17、miR-18、miR-19a、miR-19b、miR-20a与miR-92a,每个成员的表达作用各不相同,平衡表达。其中miR-17在大量研究中表现出具有抑癌作用,通过靶定癌基因、抑癌基因、凋亡蛋白及细胞因子影响癌细胞的生长、增殖、迁移及浸润过程。miR-17-92 cluster反转录病毒表达载体感染Balb/c小鼠,可造成小鼠脾肿大,脾细胞增生,并诱导多潜能造血干细胞增生,这些多潜能造血干细胞在体内、体外能够诱导分化为T细胞和B细胞及各种血细胞。miR-17能够调控Bim蛋白的表达,Bim蛋白为Bcl-2蛋白家族的主要成员之一,可以与Bcl-2蛋白结合形成二聚体置换出Bax蛋白,Bax蛋白能够促进细胞凋亡,这是Bcl-2家族蛋白促凋亡的经典通路之一。因此本文的研究目的是探讨miR-17能否通过调节Bcl-2凋亡通路,促进T、B淋巴细胞增生,增强机体免疫反应抑制乳腺癌发生,发展及转移的机制。在成年Balb/c小鼠乳腺组织处种植4T1乳腺癌细胞,4T1细胞能够发生肺部转移,以在不同的时间点给小鼠注射miR-17反转录病毒分组,共分3组,一组为种植肿瘤前一周注射miR-17反转录病毒,一组为种植肿瘤同时注射miR-17反转录病毒,一组为种植肿瘤一周后注射miR-17反转录病毒,每周测量一次肿瘤的大小。在种植肿瘤后的第五周取材,比较肿瘤组织的大小,肺部转移灶的大小及数量,确定miR-17是否能抑制小鼠乳腺癌的生长及转移;通过western blot检测脾蛋白的Bcl-2和Bax的表达,观察miR-17是否能调节Bcl-2凋亡通路;通过流式细胞仪检测CD4、CD8、CD19、CD34细胞含量是否有所变化,观察miR-17是否能调节T、B细胞含量;通过对肿瘤组织CD8抗体免疫组化染色,观察miR-17是否促进CD8细胞对肿瘤细胞的浸润侵袭作用。通过以上实验,本课题观察到给予miR-17治疗的小鼠肿瘤组织较模型组小,且肺部转移灶少,转移肿瘤的面积较小,说明miR-17抑制乳腺癌的生长及转移,Bcl-2表达上升,Bax表达下降,说明miR-17通过Bcl-2凋亡通路抑制脾细胞凋亡,流式细胞检测CD4、CD8、CD34细胞含量增加,说明miR-17促进淋巴细胞及造血干细胞增生,提高机体免疫功能,且miR-17作用时间越长,抑制乳腺癌的作用越明显。这表明miR-17能够上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制淋巴细胞的凋亡促进CD4、CD8细胞增生,CD34干细胞增生,增强免疫系统的反应,从而抑制乳腺癌的生长及转移。