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目的近年来,恶性肿瘤发病率不断地增高,严重危害着人类健康。据统计,世界范围内最常见的恶性肿瘤,胃癌排名第4位,手术、化疗及放疗三大常规治疗效果差,远期生存率低,因此,如何提高治疗效果,改善患者的生活质量,预防胃癌复发及转移是目前研究的热点之一。伴随着免疫学理论以及分子生物学的不断发展,人们对肿瘤与免疫系统之间的关系的深刻认识,肿瘤免疫治疗越来越引起人们的重视。其中过继性细胞免疫疗法(Adoptive cell immunotherapy,ACI)中的细胞毒T细胞(Cytotoxic T lymphocyte, CTL)因杀瘤谱广、杀瘤活性高、增殖能力强、特异性高等特点成为焦点。本研究旨在探讨表达癌胚抗原的重组腺相关病毒(rAAV/CEA)转染DC生成的CTL对胃癌细胞株的杀伤作用,为肿瘤治疗提供新的技术方法。方法1.取健康人外周血,Ficoll分离液分离淋巴细胞,将获得的贴壁细胞(DC)分为2组：第1组加入rAAV/CEA病毒液；第2组加PBS液。两组细胞均加入GM-CSF、 rhIL-4、TNF-α诱导其生长、成熟。两组成熟DC按1:20与效应T细胞混合培养,诱导生成CTL。2.FAM检测CEA转染率、成熟DC表型、CTL亚群比例、CTL体外杀伤率。3.应用SPSS17.0统计软件,对所取得的数据进行分析,P<0.05表示差异有统计学意义。结果1.倒置显微镜观察,培养2-3d后贴壁细胞由圆形逐渐变为不规则形,体积逐渐变大；5d后,细胞体积变得更大,表面有大量长短不一,毛刺状突起,呈现典型的树突状细胞形态。2.转染组DC高水平表达CD86和CD40(96.37±2.08%,89.53±1.79%)；未转染组则为81.95±2.64%、67.96±2.88%,组间差异明显(P<0.01)。3.转染组CEA表达率95.25±2.41%,未转染组表达较低,两组差异有显著统计学意义(P<0.05)。4.DC与原始T细胞共培养,倒置显微镜下可见T细胞形成大小不等的集落。5.转染组CTL表面标志CD8+T, CD8+/CD4+的表达比例分别为87.12±2.30%,14.87±2.48%；而对照组的表达比例分别为70.17±2.12%、9.82±1.99%。差异具有统计学意义(P<0.05)。6.转染组诱导CTL对BCG-803胃癌细胞株的杀伤率随着E/T比例(20：1,40：1,80：1)的增加而逐渐增高,且杀伤率显著高于PBS组(P<0.05)。结论1. rAAV/CEA转染DC,获得成熟DC细胞,倒置显微镜观察与未转染组DC相比形态无明显差异。2. rAAV/CEA转染的DC细胞,CEA阳性细胞率为95.25±2.41%,此结果说明CEA在DC前体细胞内表达良好。3. rAAV/CEA-DC高表达CD86、CD40与未转染组DC有明显差异。4. rAAV/CEA转染DC细胞诱导的CTL与未转染组相比,具有较高的CD8+T,CD8+/CD4+的表达比例,差异显著。5. rAAV/CEA转染诱导的CTL具有较强的杀伤肿瘤细胞的能力,杀伤率随着E/T比例(20：1,40：1,80：1)的增加而逐渐增高。