论文部分内容阅读
研究目的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种临床表现复杂多样的炎性肠病(IBD,inflammatory bowel disease),以结肠粘膜弥漫性炎症为特点。近年来,UC的发病率持续增长,且具有癌变的高风险性,但是现代医学对其仍旧缺乏特异性的疗法,给患者和社会均带来了严重的影响。目前研究表明,UC的发病与JAK/STAT信号通路过度激活导致肠粘膜免疫稳态失衡密切相关,因此需要对JAK/STAT信号通路的开启和传导进行精密的负性调控,避免过强的免疫应答,从而恢复免疫平衡。本课题从负性因子调控的角度出发,选择JAK/STAT信号通路上的负性调控因子SOCS2、SOCS3,从基因和蛋白的水平探讨四神丸治疗脾肾阳虚型UC的作用机制。研究方法采用番泻叶灌胃+氢化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌肠法建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。将90只wistar大鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺嘧啶(SASP)组及四神丸高、中、低剂量组,造模成功后,除空白组外,四神丸高、中、低剂量组分别给予以四神丸生药10、5、2.5g/kg/d灌胃治疗;SASP组给予SASP混悬液0.36g/kg/d灌胃治疗,模型组予等量的生理盐水灌胃治疗,共计21天。21天后处死老鼠取结肠,观察大鼠形态及结肠损伤情况,光镜下观察大鼠结肠病理改变,采用RT-qPCR法检测各种大鼠结肠中的SOCS的基因表达;采用SP免疫组化和WB免疫印迹法检测各组大鼠结肠中的SOCS2、SOCS3的蛋白表达。结果1.RT-qPCR法检测结果SOCS:与空白组比较,模型组表达显著降低(P<0.01),与模型组比较,各治疗组表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。2.SP法检测结果(1)SOCS2①阳性细胞在空白组大鼠结肠组织中的粘膜下层、粘膜层中有高表达,表现为棕黄色颗粒,模型组为低表达,各治疗组呈较高或中等表达。②平均光密度值结果:与空白组比较,模型组SOCS2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组表达明显升高(P<0.01)。(2)SOCS3①阳性细胞在空白组大鼠结肠组织中的粘膜层、肌层中有高表达,表现为棕黄色颗粒,模型组为低表达,各治疗组呈较高或中等表达。②平均光密度值结果:与空白组比较,模型组SOCS3表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组表达明显增强(P<0.01,P<0.05)。3.Wb法检测结果(1)SOCS2:与空白组比较,模型组表达显著降低(P<0.01),与模型组比较,各治疗组表达明显升高(P<0.01,P<0.05)。(2)SOCS3:与空白组比较,模型组表达显著降低(P<0.01),与模型组比较,各治疗组表达明显升高(P<0.01)。结论1.番泻叶灌胃+氢化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇溶液灌肠法能成功的复制脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。2.脾肾阳虚是UC的重要病机,脾肾阳虚证是UC的重要证型,温肾健脾法是UC的重要治法。3.四神丸能升高脾肾阳虚型UC大鼠模型结肠组织中SOCS mRNA及SOCS2/3蛋白的含量,从而抑制炎症反应,恢复免疫稳态,达到治疗UC的目的。4.四神丸治疗溃疡性结肠炎的作用机制可能是干预了溃疡性结肠炎肠粘膜微环境中JAK/STAT信号通路负性调控因子SOCS2、SOCS3的表达,对负性调控因子表达的调控可能是治疗UC的重要靶点。