论文部分内容阅读
随着化学农药的使用,其弊端也逐渐显露出来,所以研发安全,高效、低毒、低残留的农药是当今农药研发的趋势。植物源农药以其高效、与环境相容性好、对非靶标生物安全等优点而受到人们青睐。杠柳(Periploca septum Bunge)是萝藦科(Asclepiadaceae)杠柳属的一种植物,近年来,一些学者对杠柳的杀虫活性进行了研究,结果显示杠柳对多种害虫具有毒杀作用,但其活性物质的结构鲜有报道。
本论文在活性化合物分离鉴定的基础上,以重要入侵害虫红火蚁(Solenopsisinvicta Buren)为对象,评价其活性及作用机理,旨在为红火蚁的无公害防治和开发新的植物源农药提供理论。
在胃毒法活性测试追踪下,对杠柳根部活性物质进行提取分离,并鉴定出化学结构。共提取出10个化合物,它们分别是:豆甾醇、β-谷甾醇、麦角甾醇、四十七烷、北五加皮寡糖A、杠柳苷X、杠柳苷A、杠柳苷Y、杠柳苷E、杠柳苷N,其中杠柳苷X为一新的化合物。
对提取出的化合物进行了杀虫活性测试。生测结果显示:北五加皮寡糖A、杠柳苷X、杠柳苷A、杠柳苷Y、杠柳苷E、杠柳苷N具有杀虫活性。6个化合物对红火蚁大工蚁经24h LD50依次为854.97μg、748.99μg/g、814.41μg/g、676.29μg、895.41μg、828.22μg/g;对红火蚁小工蚁经24h LD50依次为405.01μg/g、116.62μg/g、208.42μg/g、243.24μg/g、502.69μg/g、533.41μg/g;对红火蚁有翅雄蚁经24h LD50依次为3446.27μg、2169.58μg、2224.11μg/g、1916.61μg、2937.09μg/g、3316.37μg/g;对红火蚁有翅雌蚁经24h LD50依次为3713.72μg/g、3079.33μg/g、3394.65μg/g、2239.29μg/g、3461.66μg/g、3742.08μg/g。
对杠柳活性物质的作用机理进行了研究。首先对杠柳苷X作用于红火蚁大工蚁后的症状进行了描述,其症状为:活动力下降,爬行缓慢;4h后开始抽搐翻滚,触角弯曲,六肢震颤抽搐,不能正常爬行,持续约10min后被击倒,击倒试虫虫体蜷曲,触角下垂弯曲,足部均弯曲蜷缩,针刺亦没有反应,随着时间的推移,试虫死亡。接着,对其中肠组织的病理变化进行了研究。对杠柳苷X作用于红火蚁大工蚁后不同时段中毒试虫的中肠进行了半薄切片并在显微镜下观察、拍照。切片结果显示:处理4h后,试虫中肠细胞和细胞核明显变大,中肠肠壁变厚,肠内容积变小,随着时间的延长,中肠肠壁细胞开始消融,细胞层之间出现亮白区域,处理16h后肠壁内层细胞大多消融,但内容物与肠壁之间界线清楚,处理24h后肠壁与内容物之间界线模糊,内容物分布散乱,中肠肠壁肌肉组织开始脱落。最后,对杠柳苷X作用于红火蚁大工蚁后不同时段中毒试虫的中肠进行了超薄切片并在电镜下观察、拍照。切片结果显示:处理4h后,试虫中肠细胞出现了空泡;线粒体数量大量减少,双层膜被破坏消失;部分微绒毛脱落;部分核膜破裂,染色质外溢;内质网数量降低,排列杂乱;处理12h后,细胞内出现大量空白,空白区域中间可能为失去膜结构的内质网;24h后很难找到细胞结构,偶有椭圆形似细胞的区域,其区域内没有任何细胞器,唯留大量块状深色物质。另外,对杠柳苷X作用于红火蚁大工蚁后不同时段中毒试虫中肠淀粉酶和脂肪酶活性进行了测定,测定结果表明:杠柳苷X可以显著抑制红火蚁中肠淀粉酶的活力,但不能显著抑制脂肪酶的活力。综上所述,试虫中肠为杠柳活性物质的作用靶标之一,可能是一种消化毒剂。
杠柳一级柱层析流份A-4是具有浓烈杠柳特殊气味的油状物,胃毒活性测试结果显示其对红火蚁大工蚁没有毒杀活性,对其驱避活性进行了测定。驱避生测结果显示该流份对红火蚁大工蚁有强烈的驱避活性。当油状物为0.01g时,已经表现出明显的驱避活性(P=0.0013);油状物剂量达到1g时,驱避活性最强(P<0.001)。GC-MS分析其化学成分,结果显示其主要成分为(E,E)-9,12-十八二烯酸(34.48%)、软脂酸(17.97%)、(Z,Z)-9,12-十八二烯酸甲酯(3.18%)和软脂酸甲酯(1.34%)。
本研究分离出的化合物结构新颖,活性高,为合理开发利用杠柳这一植物资源及使用植物源农药防治红火蚁提供了理论依据。