苹果锈果类病毒PCR检测及防控研究

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苹果是我国重要的经济树种。近年来,苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)引起的苹果锈果病严重影响着苹果的产量和果实品质,且苹果锈果类病毒一旦侵染树体,尚无有效的根治措施。苹果锈果病严重威胁苹果产业的健康发展。因此,探究苹果锈果病的防治方法迫在眉睫。本研究建立了苹果锈果类病毒的实时荧光定量方法,并利用该方法测定了嘎啦和中秋王果皮中苹果锈果类病毒含量特征。本试验以携带等量ASSVd的红珍珠海棠组培苗为试材,设置单因素试验,调整了继代培养基中Zn、B、Mn微量元素的含量和NAA、IBA、6-BA、IAA植物生长调节剂的含量,继代30天时,利用实时荧光定量测定组培苗中ASSVd的含量。同时,田间根施生物有机肥A和土壤调理剂B探究两种肥料在不同配比和不同年限下对锈果病的矫治效果,叶面喷施微量元素探究不同浓度的Zn和B对锈果病的矫治效果,果实成熟时测果实锈果病发病率,果实品质。主要研究结果如下:  1.建立苹果锈果类病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。利用本实验室前人设计的ASSVd特异性引物,以体外转录的RNA为标准品绘制标准曲线,并对体系的重复性和灵敏性进行验证。研究表明:建立的标准曲线相关系数达0.998,扩增效率为88%;可以检测到3.43×104拷贝/微升的病毒;重复性好,组内重复和组间重复Ct值的变异系数均小于1.41%。  2.感病苹果果皮上苹果锈果类病毒含量特征。以感病嘎啦和中秋王为试料,利用实时荧光定量方法检测果实膨大期和果实采摘期的无病斑部位、病斑部位和感病无斑果的果皮中ASSVd含量,结果表明:嘎啦和中秋王果实采摘期三部位果皮的平均ASSVd含量均大于果实膨大期;果实膨大期,果皮病斑处比无病斑处平均ASSVd含量高,无病斑处与感病无斑果的平均ASSVd含量无明显差异;果实采摘期,嘎啦果皮中ASSVd的含量特征与果实膨大期相同,中秋王果皮的ASSVd含量特征与果实膨大期不同,感病无斑果、无病斑处与病斑处ASSVd的含量无依次增高。说明随着果实的生长,ASSVd的整体含量增加;发病部位比不发病部位的平均苹果锈果类病毒含量高。  3.探究植物生长调节剂(NAA、6-BA、IAA、IBA)对组培苗中ASSVd含量的影响。当NAA浓度为0.05 mg/L时,调整6-BA浓度使其范围在(0-1.5) mg/L,苹果锈果类病毒含量无明显变化;当6-BA含量为0.5 mg/L时,调整NAA浓度使其范围在(0-0.3)mg/L,NAA浓度达到0.1mg/L时,苹果锈果类病毒的含量显著高于其他处理。NAA、IAA、IBA浓度在0.5 mg/L时,苹果锈果类病毒含量无明显变化。因此,培养基中植物生长调节剂的种类和浓度影响苹果锈果类病毒的含量。  4.探究微量元素(Zn、Mn、B)对组培苗中ASSVd含量的影响。结果表明:苹果锈果类病毒含量随着Zn含量的升高总体呈下降趋势。相关性分析表明,组培苗中的Mn、B、Cu、Fe含量与苹果锈果类病毒的含量不相关,Zn与ASSVd在0.05水平上显著负相关。说明增加培养基中Zn的浓度可以降低组培苗中ASSVd的含量。  5.田间根施生物有机肥A和土壤调理剂B对苹果锈果病的矫治效果研究  (1)以发病的10年生矮砧密植红富士为试材,探究生物有机肥A微生物菌肥和土壤调理剂B土壤调节剂连续施入不同年限后对苹果锈果病的影响。结果表明:与对照相比较,其中施用一年的感病指数就降低了53.75%,防控率达到59.07%,施用三年的感病指数降低了90.5%,防控率高达99.45%。说明施用生物有机肥A和土壤调理剂B可以改善苹果锈果病,且施肥时间越长防控率越高,连续施用三年以上,基本可以使感病果树不显症状,同时提高果实品质。  (2)以发病的5年生矮砧密植红富士为试材,探究生物有机肥A(5kg、7.5kg)和土壤调理剂B(1.5kg、2.5kg、3.5kg)不同配比对苹果锈果病的影响。结果表明:单株施用生物有机肥A和土壤调理剂B7.5kg和3.5 kg时的苹果锈果病感病指数最低,防控率达到24.06%,与对照相比降低了15.76%。说明施用生物有机肥A和土壤调理剂B可以改善苹果锈果病,施肥量越大防控率越高。  6.叶面喷施Zn、B元素对锈果病的矫治效果研究。以发病的5年生矮砧密植短枝富士为试材,通过叶面喷施探究不同浓度微量元素Zn、B对苹果锈果病的影响,结果表明:ZnSO4·7H2O、H2BO3浓度在3.5 g/L、1.25 g/L的感病指数最低,达到29.44%,指数降低也最大,达到33.05%,防控率最高,达到52.89%;浓度在0.35 g/L、0.125 g/L时,指数降低16.31%,防控率26.10%。说明叶面喷施Zn、B元素可以达到防控锈果病的目的,但对果实品质的改善效果不大。
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