基于滚环扩增合成的核酸大分子的纳米自组装

来源 :中国石油大学(华东) | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenming88623
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1953年,Watson和Click提出DNA的双螺旋构型开启了分子生物学的辉煌大门,DNA纳米技术得以发展起来。近几十年来,基于DNA分子的可编程性和可识别性,DNA的自组装被认为是一种构建DNA纳米结构的优良方法。此方法包括DNA折纸术、DNA模块组装等,然而因序列设计的复杂性,以及对纳米尺度拓展的有限性,一定程度上限制了自身的发展。为了简化繁琐的序列设计,进一步扩展DNA纳米结构的尺寸,论文开发了一种简单有效的构建大规模DNA组装体的方法。本文基于滚环扩增技术(Rolling circle amplification)合成的长单链DNA,制备出了不同宽度和大小的DNA纳米结构,并用透射电镜、原子力显微镜等对其进行了形貌的表征;本文还利用超分支滚环扩增(Hyper branched rolling circle amplification,HRCA)制备了一种DNA水凝胶,对凝胶的形貌状态进行了表征,并对凝胶的流变学性能做了初步的研究。本文主要研究内容包括以下几个方面:(1)为实现滚环扩增合成长链DNA,本文设计了模板的环化方案,并利用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行验证和提纯;探究了不同剪切酶的添加对合成产物的影响,并利用紫外光谱对合成产物进行了表征,验证所制产物的纯度,并利用滚环扩增实验证明了产物为预设的环状DNA产物;另外还探讨了影响RCA和HRCA产物的条件,利用琼脂糖凝胶电泳、透射电镜、扫描电镜等对产物进行了表征,为制备用于构筑纳米组装体的长链DNA奠定了基础。(2)利用RCA合成的长链大分子结合短链DNA构筑了纳米梯子。通过改变短链的长度和个数,并在单纳米梯子的一侧或两侧巧妙的留有粘性末端,成功完成了三并梯子、五并梯子和纳米织锦等纳米结构的自组装,利用透射电镜和原子力显微镜对产物进行表征,得到了相应宽度且均匀的纳米梯子,证明了预设的构思。(3)利用HRCA技术制备了一种DNA水凝胶,通过透射电镜和扫描电镜观察到该凝胶是一种三维网络结构,并对凝胶的流变学性质做了的初步的探讨,探究了角频率、应变、温度等对凝胶模量的影响,并对能够形成凝胶的主要作用力进行了简单分析。
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