一、目的从上调mdr1基因诱导血脑屏障上P-gp的外向转运和上调CYP3A基因诱导肝药酶以加速体循环代谢两个途径研究中枢抑制药物阿米替林中毒的解毒机制。在体内考察预先给予不同剂量及时长的地塞米松后对大鼠阿米替林代谢动力学的影响和脑-血药物浓度比值;并测定大鼠脑组织及肝中CYP3A2和P-gp编码基因的表达水平,以探讨其影响机制。二、方法1.给药及采样1.1选用清洁级健康成年雄性wistar大鼠（250-300g）40只,按完全随机分组设计,分为八组,每组5只。分别连续腹腔注射玉米油4天（K_a组）、地塞米松玉米油溶液(1mg·kg^-1)2天（2L_a组）、地塞米松玉米油溶液(1mg·kg^-1)4天（4L_a组）、地塞米松玉米油溶液(5 mg·kg^-1)2天（2M_a组）、地塞米松玉米油溶液(5mg·kg^-1)4天（4M_a组）、地塞米松玉米油溶液(25mg·kg^-1)2天（2H_a组）、地塞米松玉米油溶液(25mg·kg^-1)4天（4H_a组）和维拉帕米生理盐水溶液(8 mg·kg^-1)注射阿米替林1小时前（Ⅰ组）,每只于静脉注射阿米替林后5,10,30,60,120,200,300和400 min眼眶后静脉丛取血。采血完毕后将各组大鼠处死,快速取肝脏组织和大脑组织,置液氮中保存。1.2选用清洁级健康成年雄性wistar大鼠40只按完全随机分组设计,每组4只,分为十组。K_b、2L_b、4L_b、2M_b、4M_b、2H_b、4H_b组前处理方法分别与K_a、2L_a、4L_a、2M_a、4M_a、2H_a、4H_a相同;4LI组、4MI组和4HI组为4L_b、4M_b、4H_b组大鼠阿米替林给药前1小时腹腔注射维拉帕米生理盐酸溶液(8mg·kg^-1)。每只于静脉注射阿米替林1h后,断头处死。收集血液和脑组织。2.生物样品测定方法2.1采用HPLC-MS测定血浆和1.2中取出的脑组织中阿米替林及其活性代谢物去甲替林的浓度。2.2采用RT-PCR测1.1脑和肝组织中mdrla及CYP3A2表达水平。三、结果1.生物样本中药物浓度的测定结果用HPLC-MS法测定阿米替林及其活性代谢物NOR的浓度。在血浆中,AMI和NOR分别在10-3200ng·mL^-1和10-1000ng·mL^-1浓度范围内线性良好。在脑组织匀浆液中AMI,NOR分别在25-2000ng·mL^-1和1.5-100ng·mL^-1浓度范围内线性良好。方法回收率均在89%-114%范围内,日间和日内精密度均<12%。2.大鼠静脉注射阿米替林药代动力学及脑/血浆药物浓度比2.1各地塞米松处理组的AMI曲线下面积(AUC_0→∞)、平均滞留时间（MRT）和清除率(CL_tot)均低于空白组（P<0.01）;但维拉帕米抑制剂组大鼠的AMI药动学参数与空白组相比,无显著性差异。2.2各地塞米松给药组与空白组大鼠的NOR曲线下面积(AUC_0→∞)和峰浓度(C_max)无显著性差异,但抑制剂组大鼠的此二者参数均大于地塞米松给药组和空白组。（P<0.01）2.3各地塞米松给药组大鼠的脑/血AMI和NOR浓度比值均低于空白组（P<0.01）。但在验证组（LI,MI,HI）中给予P-gp抑制剂维拉帕米后仍未能逆转AMI和NOR在大鼠脑部的减少,分别与4L_b,4M_b,4H_b组比较无显著性差异。3.各组大鼠脑和肝组织中mdrla及CYP3A2的表达水平3.1随着地塞米松给药剂量的加大和用药时间的延长,大鼠肝组织中mdrla和CYP3A2的表达水平升高,且各地塞米松处理组的表达量明显高于空白对照组。3.2相比空白组,各地塞米松组大鼠脑组织中mdrla的表达水平无明显改变。四、结论1.长时间大剂量给予地塞米松可诱导大鼠肝组织中mdrla和CYP3A2的表达,并加速AMI的代谢和消除,其中以肝药酶诱导占主要因素。代谢物NOR在体内的消除受P-gp影响较大,因去甲替林为AMI的主要活性代谢物,其活性与母药相似,故P-gp的诱导对于AMI体内消除,解除其大剂量时的中毒亦具有重要意义。2.试验发现地塞米松可降低大鼠脑部AMI和NOR的浓度分布,从而减少毒（药）物在中枢部位的蓄积。但是给予P-gp抑制剂维拉帕米未能逆转药物分布减少的趋势,且未观察到mdrla基因表达的变化,故有待进一步考证地塞米松降低AMI及NOR中枢浓度的作用机制。