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目的:探讨谷氨酰胺对大鼠肠缺血再灌注(Ⅱ/R)后肺损伤的影响,从肠缺血再灌注后炎症调控以及肠黏膜屏障等角度探讨其可能的机制,为临床围术期营养治疗提供理论依据。
方法:1.健康雄性SD大鼠45只,随机分组并分为两部分,均采用免疫印迹方法,分别观察不同剂量谷氨酰胺对正常大鼠肺脏HSP-70表达的影响,以及谷氨酰胺对HSP-70表达是否具有时程效应。2.选择健康雄性SD大鼠25只,随机分为假手术组、对照组以及谷氨酰胺0.15、0.45、0.75g/kg组,采用大鼠肠缺血再灌注模型,在模型建立前预先静脉给予谷氨酰胺,肠缺血60min再灌注90min后,光镜和电镜下观察大鼠肠缺血再灌注后肺脏和小肠组织形态学变化,通过生化方法测定丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、伊文氏兰含量的变化;采用免疫组织化学、免疫印迹以及realtimePCR方法观察谷氨酰胺对HSP-70、ICAM-1、TNF-α表达的影响。3.在对其机制的进一步研究中,25只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、槲皮素组、谷氨酰胺组以及槲皮素+谷氨酰胺组(Sham、Con、Q、Gln、Q+G),通过腹腔注射HSP-70的抑制剂槲皮素,免疫印迹法观察大鼠肠缺血再灌注后HSP-70、NF-κB在肺脏中的表达变化,并结合肺脏组织形态学以及MDA、MPO、ICAM-1的变化,观察HSP-70、NF-κB与谷氨酰胺的作用关系;利用TUNEL法观察谷氨酰胺对肠黏膜上皮凋亡的影响并测定小肠黏膜谷胱甘肽的含量,探讨谷氨酰胺对肠缺血再灌注后肺保护作用的肠道机制。
结果:1.谷氨酰胺可以剂量依赖性增强HSP-70在大鼠肺脏的表达,并具有时程效应。大鼠肠缺血再灌注后肺损伤评分显著增高,肺组织MDA、MPO以及伊文氏蓝渗出量明显增加,同假手术组相比,差异具有显著意义,P<0.01;谷氨酰胺组大鼠Ⅱ/R后肺脏MDA、MPO以及伊文氏蓝渗出量明显低于对照组,同时ICAM-1、TNF-α基因表达降低,同对照组相比,差异具有显著意义。大鼠II/R后小肠损伤评分以及伊文氏蓝渗出量增高,同对照组相比,谷氨酰胺组大鼠小肠损伤评分降低,伊文氏蓝渗出减少,尤以谷氨酰胺0.75g/kg组最为明显,P<0.01。2.大鼠腹腔注射槲皮素后,肺脏中MDA、MPO水平与对照组相比,差异无显著意义,P>0.05;谷氨酰胺组大鼠HSP-70表达明显增加,同Q组以及G+Q组相比,差异具有显著意义,P<0.05;谷氨酰胺组大鼠肺脏NF-κB表达以及MDA、MPO水平明显低于Q组以及G+Q组。对照组大鼠肠缺血再灌注后肠黏膜细胞凋亡增加,谷胱甘肽含量降低,同谷氨酰胺组相比,差异具有显著意义,P<0.01。
结论:1.大鼠肠缺血再灌注后肺组织ICAM-1、TNF-α表达增高,促进了中性粒细胞在肺内的积聚,是肠缺血再灌注后肺损伤的重要原因之一。2.谷氨酰胺能够剂量依赖性增强热休克蛋白-70表达,并具有时程效应;预先应用谷氨酰胺可以降低ICAM-1、TNF-α表达,减少大鼠肠缺血再灌注后肺脏损伤;诱导热休克蛋白-70表达进而抑制NF-κB的过度产生,可能是其肺保护作用的机制之一。3.谷氨酰胺可以增加大鼠肠黏膜谷胱甘肽含量,减少肠缺血再灌注后小肠黏膜细胞凋亡;保护肠道黏膜屏障可能是其减轻肠缺血再灌注后肺损伤的重要机制。