【摘 要】
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目的:本研究探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（Secreted protein acidic and rich cysteine,SPARC）在肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）侵袭和转移中的作用,旨在发现SPARC在肝癌中的下游通路和靶基因,为肝癌发病研究和治疗提供理论基础。方法:通过转录组基因芯片技术系统性的分析了外源性SPARC在肝癌HepG2细胞中上调的基
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目的:本研究探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（Secreted protein acidic and rich cysteine,SPARC）在肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）侵袭和转移中的作用,旨在发现SPARC在肝癌中的下游通路和靶基因,为肝癌发病研究和治疗提供理论基础。方法:通过转录组基因芯片技术系统性的分析了外源性SPARC在肝癌HepG2细胞中上调的基因标签（Gene signatures）。再通过定量聚合酶链式反应（Quantitative polymerase chain reaction,q-PCR）验证了 SPARC 对靶基因在转录水平的调控作用。慢病毒转染以GFP为标记的SPARC高表达质粒,建立和筛选出稳定细胞系。利用Transwell技术和免疫荧光细胞骨架蛋白染色观察肿瘤生物学行为。通过Western Blot技术在稳定细胞株观察SPARC对MAPK/ERK信号通路的影响。在裸鼠体内通过活体成像技术观察稳定细胞株在体内的血行转移情况。最后,在HCC临床标本验证SPARC与靶基因以及肿瘤低分化的相关性。结果:在SPARC刺激上调的基因芯片中发现了与细胞黏附和侵袭（RAB31,TIGAR）、炎症和免疫、分化和增殖相关的靶基因的富集。外源性和肿瘤来源的SPARC在促进肝癌细胞侵袭和转移中有促进作用。肿瘤来源的SPARC激活MAPK/ERK信号通路,且SPARC高表达与裸鼠肺内微小转移克隆的形成有关。临床标本验证表明SPARC与靶基因RAB31/TIGAR,MAKP/ERK信号通路,以及肿瘤低分化相关。结论:在HepG2肝细胞肝癌发生发展中,SPARC不仅在间质细胞,尤其在肝癌细胞中表达量上调,通过激活MAPK/ERK关键蛋白磷酸化,进而增加下游SPARC相关促进肿瘤侵袭和迁移的靶基因谱（包括TIGAR/RAB31）表达,临床肝癌标本验证发现SPARC的表达与MAPK/ERK、靶基因RAB31、TIGAR及肿瘤低分化相关,这表明SPARC通过激活MAPK/ERK-TIGAR/RAB31通路促进肝癌的侵袭与转移。
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