论文部分内容阅读
目的：快速鉴定泸州地区抗酸染色阳性痰标本中分枝杆菌的菌种、研究与异烟肼耐药相关的过氧化氢酶-过氧化物酶(catalase-peroxidase enzyme)的编码基因katG基因的突变情况。方法：1.收集临床诊断为肺结核的病人抗酸染色为阳性的痰液标本120例(初治组49例,复治组71例),其中肺结核伴合并症18例,肺结核无合并症102例。2.运用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增结核分枝杆菌复合群(mycobacterium tuberculosis Complex,MTC)特异性插入序列6110(IS6110),将扩增产物用琼脂糖凝胶电泳并检测目的条带。3.扩增检测为结核分枝杆菌的107例标本(初治43例,复治64例)的katG基因片段进行序列测定,与人型标准结核菌株H37RV的基因序列进行比较。结果：120例抗酸染色阳性的痰标本中,有13例(10.83%,13/120)未能扩增出IS6110基因片段：6例为初治组病例,7例为复治组病例,两组IS6110检出率相比较无显著性差异；而肺结核伴合并症组与肺结核无合并症组相比IS6110检出率有显著性差异。107例IS6110阳性的痰标本中,共25例(23.36%,25/107)存在katG基因的突变。初治与复治组相比较katG基因突变率无显著性差异；若以异烟肼服用时间分组比较,超过6个月组与6个月以内组katG基因突变率存在显著性差异。基因突变形式：24例为单碱基突变,1例为双碱基突变,其中14例(56.00%,14/25)315位点突变(9例密码子AGC→ACC、3例密码子AGC→ATC和2例密码子AGC→AAC);5例317位点突变,密码子ATC→GTC;2例304位突变,密码子GAC→GAG; 3例为270位点突变,密码子CAC→CAT;1例为270和271双位点突变,密码子ACT→GTT。结论：1.本地区临床诊断肺结核患者的痰标本中,有13例(10.83%,13/120)未扩增出结核分枝杆菌群特异性IS6110片段,提示可能为非结核分枝杆菌(non-tuberculousis mycobacteria, NTM)肺部感染,初治与复治组相比较,NTM的感染率无显著性差异。2.合并免疫力低下或长期使用免疫抑制剂的疾病时,出现NTM感染的机率明显高于肺结核无合并症患者。3.本地区诊断肺结核患者的痰标本中,23.36%(25/107)存在katG基因突变,突变都发生在异烟肼耐药易突变区,提示本地区结核分枝杆菌中存在一定水平的异烟肼耐药；长期接受异烟肼治疗(>6个月)的患者,产生katG基因突变的机率明显高于短期治疗(<6个月)患者,建议临床医师高度重视异烟肼用药时间与耐药的关系,及时进行筛查调整化疗方案；4.katG315突变是泸州地区结核杆菌产生INH耐药性的主要分子机制。5.利用分子生物学方法对临床痰标本进行检测,是一种简便快速的检测技术,可实现快速诊断及耐药的初步判断,为临床的化疗和防止耐药菌的播散提供帮助。