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目的本研究通过21天慢性束缚应激方法建立肝郁脾虚证大鼠模型,用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELIS A）,实时荧光定量 PCR（Real-time quantitive PCR,RT-qPCR）,蛋白质印迹法（Western Blot,WB）,从基因和蛋白水平,检测外周血中的饥饿素（Ghrelin）、神经肽Y（Neuropeptide Y,NPY）的含量,下丘脑弓状核（Arcuate nucleus,ARC）中的食欲因子饥饿素受体（Growth hormone secretogogue receptor,GHSR）、神经肽Y、a-黑素细胞刺激激素（a-melanocyte stimulating hormone,a-MSH）的表达。实验结果为肝郁脾虚证所表现出来的食欲减退、体重减轻、大便稀溏等脾失健运脾胃运化失常的生物学基础提供实验依据;用中药复方逍遥散作为干预方,揭示其疏肝健脾的作用靶点和机理。方法（一）肝郁脾虚证大鼠模型的制备将44只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组。正常组不予束缚,灌胃去离子水;模型组每天束缚3h,连续21天,束缚前半小时灌胃去离子水;氟西汀组每天束缚3h,连续21天,束缚前半小时灌胃氟西汀溶液;逍遥散组每天束缚3h,连续21天,束缚前半小时灌胃逍遥散溶液。实验第22天取材。21天的束缚过程中,观察大鼠的外观表征、体重、摄食量、旷场实验各指标及逍遥散的调节作用。（二）慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠外周血及下丘脑弓状核相关食欲因子的变化将44只SD雄性大鼠随机分成正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组。造模方法同上。于实验第22天取材,用ELISA,实时荧光定量PCR,Western Blot分子生物学方法,检测外周血中的Ghrelin和NPY含量,下丘脑弓状核中的GHSR、NPY和a-MSH表达。结果（一）肝郁脾虚证大鼠模型的制备慢性束缚应激第21天,外观表征上,模型组大鼠无挣脱,毛发枯黄,目眦不净,大便呈稀水状,脾虚表现明显。体重、摄食及旷场实验各指标模型组大鼠均有下降。逍遥散组则有所改善。（二）慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠外周血及下丘脑弓状核相关食欲因子的变化1.ELISA法检测各组大鼠血浆Ghrelin和血浆NPY的含量Ghrelin:与正常组相比,模型组明显下降,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有上升,其中氟西汀组比模型组的上升有统计学差异。NPY:与正常组相比,模型组有下降趋势,差异无统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有上升,其中西药组的上升有统计学差异,中药组的上升有显著统计学差异,以西药组更接近正常组。2.RT-qPCR法检测各组大鼠下丘脑弓状核GHSR、NPY、a-MSH的变化GHSR:与正常组相比,模型组明显下降,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有明显上升,差异有显著统计学意义。NPY:与正常组相比,模型组明显下降,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均明显上升,差异有显著统计学意义;其中中药组与正常组的差异尚有统计学意义,故以西药组调节效果为好。a-MSH:与正常组相比,模型组明显上升,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均明显下降,差异有显著统计学意义;其中西药组与正常组的差异尚有统计学意义,故以中药组调节效果为好。3.Western Blot法检测各组大鼠下丘脑弓状核GHSR、NPY、a-MSH的变化GHSR:与正常组相比,模型组下降,差异有统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有上升接近正常组的趋势,差异无统计学意义。NPY:与正常组相比,模型组明显下降,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有上升趋势,但与正常组尚有显著性的差异,故调节效果均不是很理想。a-MSH:与正常组相比,模型组明显上升,差异有显著统计学意义;与模型组相比,两个药物组均有下降,但以西药组更接近正常组,效果更好。结论1.每天3h,连续21天的慢性束缚应激方法能成功复制出肝郁脾虚证大鼠模型。大鼠的外观表征、体重、摄食量及旷场实验各项指标综合表明,21天慢性束缚应激方法能成功复制出肝郁脾虚证大鼠模型。2.慢性束缚应激肝郁脾虚证大鼠下丘脑弓状核中GHSR、NPY、a-MSH蛋白与基因表达变化趋势一致:GHSR与NPY的蛋白与基因表达下降,a-MSH的蛋白与基因表达上升。RT-qPCR、Western Blot法检测模型大鼠下丘脑弓状核中GHSR、NPY的蛋白与基因均下降,a-MSH的蛋白与基因均明显上升;ELISA法检测模型大鼠血浆Ghrelin明显下降,血浆NPY呈下降趋势。研究结果表明:下丘脑弓状核中GHSR和NPY的蛋白与基因表达下降,a-MSH的蛋白与基因表达上升,可以作为肝郁脾虚证所表现出来的食欲减退、体重减轻、大便稀溏等脾失健运脾胃运化功能失常的部分生物学基础并,以此为切入点揭示了肝郁脾虚证脾失健运的中枢神经内分泌机制,及中药复方逍遥散疏肝、解郁、健脾的作用靶点和机理;下丘脑弓状核中GHSR、NPY、-MSH蛋白与基因的表达变化,可以纳入肝郁脾虚证模型的评价体系,以期为诠释肝郁脾虚证的科学内涵提供实验依据。