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目的:本研究旨在探讨P2X4受体(P2X4 receptor,P2X4R)过表达后对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型中脑黑质内白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)表达的作用,进一步探究P2X4R激活引起的细胞内级联炎症反应在帕金森病发病机制中的影响,最终目的是为帕金森病更有效的靶向治疗提供理论依据。方法:采用SPF清洁级Wistar雄性大鼠,按照完全随机原则分成6组,即对照组,6-OHDA组,P2X4R基因过表达组(P2X4R-overexpression,P2X4R-OE组),P2X4R阴性对照组(P2X4R-negative control,P2X4R-NC组),P2X4R-OE+6-OHDA组,P2X4R-NC+6-OHDA组。饲养条件完全相同。应用脑立体定位仪定位大鼠左侧黑质后,6组大鼠药物注射方法如下:1.对照组(Control组):定向注射仅含0.02%维生素C的生理盐水;2.6-OHDA组:定向注射新鲜配置的6-OHDA;3.P2X4R基因过表达组(P2X4R-OE组):定向注射携带P2X4R过表达靶基因的慢病毒;4.P2X4R阴性对照组(P2X4R-NC组):定向注射空载阴性慢病毒;5.P2X4R-OE+6-OHDA组:首先定向注射携带P2X4R过表达靶基因的慢病毒,1周后以相同方法注射6-OHDA;6.P2X4-NC+6-OHDA组:首先定向注射空载阴性病毒,1周后以相同方法注射6-OHDA。各组造模2周后,给予腹腔注射阿扑吗啡开始行为学检验,记录30分钟内大鼠右转的次数,转速≥7次/min表示造模成功,连续诱导3次,每周1次,筛选出造模成功大鼠。将各组造模成功大鼠以异氟醚吸入麻醉后断头取脑。制备大鼠脑冰冻切片,应用免疫荧光染色法测定各组大鼠黑质中酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)阳性多巴胺能神经元数目及变化趋势;冰上快速取出中脑黑质,通过免疫印迹法(Western blot法)测定各组大鼠黑质中P2X4R、IL-6蛋白表达量及变化趋势。结果:1.免疫荧光染色结果显示:与对照组比较,6-OHDA组、P2X4R-NC+6-OHDA组大鼠中脑黑质TH阳性多巴胺能神经元计数显著降低(P<0.001),差异有统计学意义;与P2X4R-NC+6-OHDA组比较,P2X4R-OE+6-OHDA组小鼠黑质TH阳性多巴胺神经元数量减少(P<0.001)。P2X4R-NC组和P2X4R-OE组大鼠黑质TH阳性多巴胺能神经元数量与对照组进行比较,结果无显著差异(P>0.5)。2.Western blots结果显示:a.与对照组相比,6-OHDA组和P2X4R-OE组大鼠黑质中P2X4R的表达明显增加(P<0.001),提示P2X4R过表达目的基因在黑质中稳定表达,PD模型大鼠黑质内P2X4R的表达明显增加;与对照组相比,P2X4R-NC组大鼠黑质中P2X4R的表达无显著性差异(P>0.5);与P2X4R-NC+6-OHDA组相比,P2X4R-OE+6-OHDA组P2X4R表达明显增加(P<0.001)。b.与对照组相比,6-OHDA组大鼠黑质中IL-6蛋白的表达明显增加(P<0.001);P2X4R-NC组与P2X4R-OE组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。P2X4R-OE+6-OHDA组大鼠黑质中IL-6蛋白的表达明显高于P2X4R-NC+6-OHDA组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:本研究结果显示,向6-OHDA诱导的帕金森病大鼠模型黑质中注射携带P2X4R过表达目的基因的慢病毒,可导致TH阳性多巴胺能神经元减少,并且可上调大鼠黑质中炎性因子IL-6的表达。根据目前已有的实验证据,我们可得出结论,小胶质细胞表面的P2X4R被激活后,导致下游信号通路被激活,产生细胞因子和其他白细胞介素因子,如IL-6,从而对多巴胺能神经元造成一定损伤作用,对PD的发生发展过程产生影响。PD发病机制的研究,可为抗帕金森病治疗提供新的方向和理论基础。