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目的:初步探讨脂肪干细胞复合膀胱无细胞基质替代输尿管缺损的可行性及其效果,寻求理想的输尿管替代方法。 方法:实验分为两个部分,第一部分:取腹部手术患者皮下脂肪组织,用原酶消化法分离出人脂肪源性干细胞,将获得的细胞分别在以下3组培养条件下培养:高糖DMEM培养基、高糖DMEM培养基+碱性成纤维生长因子(basicfibroblast growth factor, bFGF)、间充质干细胞培养基(Mesenchymal Stem CellMedia,MSCM)。取第2或者第3代细胞进行以下实验:细胞免疫荧光及流式细胞仪鉴定所培养的细胞;绘制细胞生长曲线观察3组细胞的生长状态;采用不同的培养条件对3组细胞进行体外培养,观察细胞的增殖情况。第二部分:以猪自体ADSCs为种子细胞,以异体猪的BAM为支架材料,将ADSCs接种于BAM表面。将6头猪分成两组,A组为采用BAM进行替代修补,B组用复合ADSCs的BAM进行替代修补。术后3个月每组猪行静脉肾盂造影,观察输尿管通畅情况,造影后将猪处死,解剖观察替代段输尿管的体内情况,取替代段输尿管组织性免疫组化染色,观察替代段输尿管上细胞和平滑肌生长情况。 结果:通过胶原酶消化法可成功地分离出脂肪源性干细胞。免疫荧光及流式细胞检测可见各组细胞均表达间充质干细胞特异性标记蛋白Stro-1,不表达CD31。采用不同的培养条件对hADSCs进行培养,发现MSCM组和高糖DMEM+bFGF组所培养的细胞数和细胞增殖速度明显优于高糖DMEM组(p<0.01)。此外,各组中所培养的细胞在MSCM和高糖DMEM+bFGF的培养条件下的增殖速率明显高于高糖DMEM培养条件(p<0.05)。猪输尿管缺损替代手术共进行6例,术后无一例死亡,都正常存活。术后3个月A组支架材料大部分降解,粘膜面可见1到2层移行上皮生长,粘膜下层可见少量肌纤维;B组支架材料基本降解,粘膜面见多层移行上皮生长,粘膜下层可见大量肌纤维和少量肌束形成以及新生的毛细血管长入。静脉肾盂造影显示A组替代侧输尿管管腔基本阻塞,无造影剂通过,B组替代段输尿管管腔狭窄,替代段以上的肾盂输尿管扩张积水,替代侧造影剂显影和排泄延迟。 结论:采用MSCM培养脂肪源性干细胞可以在短期内获得大量的细胞,在传统的高糖DMEM培养基中加入bFGF后也可以获得相似的效果,可以满足组织工程研究的种子细胞数量的要求。以ADSCs复合的膀胱无细胞基质作为重建猪输尿管缺损的支架材料,术后替代段输尿管无明显挛缩或坏死,其上可以形成输尿管上皮层和平滑肌层,能够恢复正常的泌尿道连接功能,以脂肪干细胞复合膀胱无细胞基质具有作为组织工程输尿管支架材料的潜在应用价值。