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目的 一氧化氮(nitric oxide，NO)是生物体内一种结构简单的双原子自由基，可作为第二信使或细胞功能调节因子参与机体内一系列生理和病理条件下的生物过程，参与人体循环、呼吸、消化及神经等系统的生理活动和病理生理事件，尤其在非特异性炎症和免疫反应中发挥重要功能。随着对NO研究的深入，其与肿瘤生物学的关系日益受到重视。大量的临床和实验研究表明，NO可以通过多种途径对肿瘤的发生、发展发挥作用。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是一种特异性地作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，在人的内脏及骨骼等组织中广泛分布，它参与一些内脏的功能调节，同时与炎症、创伤、肿瘤等病理过程密切相关。VEGF在人类多种恶性肿瘤中呈高表达，且VEGF表达水平与肿瘤组织中的微血管密度(MVD)呈正比。卵巢恶性肿瘤是女性生殖器三大恶性肿瘤之一，由于至今缺乏有效的诊断方法，其存活率很低，而卵巢浆液性囊腺癌是卵巢恶性肿瘤中最常见者。查阅大量资料发现，国内外对NOS、VEGF在人卵巢上皮性癌中的表达及其与肿瘤血管生成的关系尚无报道。本研究应用免疫组织化学方法对40例卵巢浆液性囊腺癌患者手术切除标本的iNOS、eNOS、VEGF及MVD进行检测，旨在探讨卵巢浆液性囊腺癌中iNOS、eNOS、VEGF表达的相关性及其与肿瘤血管生成的关系，一方面可以为阐明卵巢癌的发病机制提供理论依据，另一方面也可为卵巢癌的预防和治疗提供新的途径。 方法 1 材料来源 标本取自1994年3月至2001年8月中国医科大学妇科住院手术患者，卵巢浆液性囊腺癌组织40例，卵巢良性上皮性肿瘤组织10例(浆液性囊腺瘤7例，粘液性囊腺瘤3例)，正常卵巢组织10例。标本经甲醛固定后常规石蜡包埋，4um厚连续切片。 2主要试剂 1 NOS兔抗人多克隆抗体、eNOS兔抗人多克隆抗体、VEGF兔抗人多克隆抗体及SABC试剂渤沟自武汉博士德生物工程有限公司，CD31鼠抗人单克隆抗体购自美国抗体诊断公司。 3实验方法 采用卵白素一生物素(SABC)一过氧化酶免疫组织化学染色法。石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢灭活内源性酶10分钟，高压修复抗原后滴加正常山羊血清封闭液20分钟，滴加适当稀释一抗4摄氏度冰箱过夜，滴加生物素化山羊抗兔工莎20分钟，滴加SABC20分钟，DAB显色，苏木素轻度复染，常规脱水、透明、封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，以己知阳性表达的肿瘤组织切片作阳性对照。 4结果判定 iNOS、eNOS及花GF的判定:阳性细胞(细胞浆或细胞膜呈棕黄或棕褐色者))10q0的标本则判定为阳性。②聊D的判定:先在低倍镜下(100x)全面观察切片，寻找高血管密度区，然后在高倍视野内(400x)计数微血管的数目。以与周围肿瘤细胞和结缔组织成分明显区别的任何一个棕色着色的内皮细胞或细胞丛作为一个微血管，只要结构不相连，其分枝结构也作为一个血管计数，记录5个视野内的微血管数，取其平均值作为该例组织的为砰D值。 5统计学处理 采用SPSSn.O软件进行分析，对MVD的比较用t检验，免疫反应结果之间的关系用r检验。以P<0.05为差异具有显著性。实验结果 liNOS、eNOS和VE邵的表达 1 NOS和VEGF均为细胞浆着色，也有胞膜同时表达者。在40例卵巢浆液性囊腺癌中有34例(8 scyo)表达iNOS，30例(7 50k)表达eNOS，卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织不表达iNOS。eNOS在卵巢浆液性囊腺癌、卵巢良胜上皮性肿瘤及正常卵巢组织的血管内皮细胞中表达阳性。叨例卵巢浆液性囊腺癌中有26例(65%)表达VEGF，卵巢良隆上皮性肿瘤中有2例(2/l的表达VEGF，表达较弱，在肿瘤血管内皮也有弱阳性表达，正常组织不表达。 2卵巢浆液性囊腺癌中iNOS、eNOS、VEGF的表达与MVD的关系 iNOS阳性的卵巢浆液性囊腺癌组织34例MVD每个高倍视野为22.76土2.48，iNOS阴性的组织每个高倍视野为19.43士1.36，两者差异有显著性(P<0.01);eNOS阳性的卵巢浆液性囊腺癌组织30例MVD每个高倍视野为21 .98士2 .72，eNOS阴性的组织每个高倍视野为23.10土2.21，两者差异无显著性(P)0.05);VEGF阳性的卵巢浆液性囊腺癌组织26例MVD每个高倍视野为23 .36士2 .30，VEGF阴性的组织每个高倍视野为20.21士1.89，两者差异有显著性(P<0.01);卵巢浆液性囊腺癌组织中MVD每个高倍视野为22.26士2.62，明显高于良性肿瘤组织的MVD(每个高倍视野为 7 .00土0 .92)及正常组织的MVD (每个高倍视野为6.24士0.96)，差异有显著性(均为P<0.001)。良性肿瘤组织与正常组织的MVD无显著性差异(P>0 .05)。 3卵巢浆液性囊腺癌中1 NOS、eNOS的表达与VEGF的关系 癌组织中，iNOS、VEGF表达均阳性者23例，VEGF表达阴性而iNOS阳性者n例;VEGF表达阳性而iNOS阴性者3例，iNOS、VEGF表达均阴性者3例;iNOS的表达与VEGF的表达无相关性(P>0.05)。eNOS、VEGF表达均阳性者22例;VEGF表达阴性而eNOS阳性者8例;VEGF表达阳性而eNOS阴性者4例，eNOS、VEGF表达均阴性者6例;eNOS的表达与VEGF的表达无相关性(P>0.05