经尿道灌注SCL基因重组慢病毒对DCP膀胱逼尿肌收缩功能影响的研究

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目的:本研究拟通过体外肌条实验,用人干细胞白血病基因(SCL)重组慢病毒转染糖尿病膀胱病变(DCP)的膀胱,观察其对DCP膀胱逼尿肌收缩功能的影响,从而为DCP的治疗新方法提供理论依据及对治疗疗效进行验证。方法:1.DCP豚鼠模型的建立:选取体重350g-450g的雄性豚鼠,使用链尿佐菌素(STZ)溶于新鲜配制的p H 4.4、浓度0.1 mol/L枸橼酸溶液中,进行腹腔内注射(200mg/kg);常规喂养6周后,豚鼠禁食水12小时,采用剪耳法测定豚鼠的静脉血糖,以连续4周血糖>16.7mmol/L为标准筛选出糖尿病豚鼠模型;糖尿病豚鼠模型造模成功后,继续高糖饮食饲养至12周后,糖尿病膀胱病变(DCP)模型诱导成功。2.SCL基因重组慢病毒转染DCP膀胱对逼尿肌收缩功能的影响:将DCP模型豚鼠随机分为3组:空白对照组(n=12)、阳性对照组(n=12)、实验组(n=12),实验前禁食水6h,麻醉生效后,实验组中经尿道灌注200万TU的SCL基因重组慢病毒液1ml;空白对照组灌注PBS液1ml;阳性对照组灌注未携带SCL基因的慢病毒+PBS液1ml;膀胱灌注后保留膀胱灌注液2小时,每次间隔1d,共3次;分别于灌注结束后第2d、7d、15d、28d,每次每组处死豚鼠3只进行实验;制备豚鼠膀胱逼尿肌肌条,温育30min后接入压力换能器,检测各组肌条收缩的幅度及频率,并记录数据。结果:诱导DCP豚鼠39只;体外肌条实验研究结果示:实验组中随灌注后时间的延长,逼尿肌收缩的幅度及频率逐渐升高,约15d时收缩幅度及频率最高,幅度0.51±0.08、频率6.26±1.81;空白对照组中随时间的延长,逼尿肌收缩的幅度及频率无明显改善,幅度0.14±0.05,频率2.78±1.15;阳性对照组中随时间的延长,逼尿肌收缩的幅度及频率无明显改善,幅度0.12±0.02、频率2.80±1.25,且肌条收缩幅度及频率呈逐渐下降趋势,可见糖尿病引起膀胱病变进一步加重。结论:经尿道灌注SCL基因重组慢病毒转染豚鼠DCP膀胱后,豚鼠的膀胱逼尿肌收缩幅度及频率较前有所恢复,提示对DCP的膀胱有一定程度的治疗效果,进一步为使用基因疗法对DCP进行治疗提供思路及依据。
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