胚胎干细胞是一种能在体外无限增殖并保持自我更新能力的细胞,它能够分化成各种不同类型的细胞。目前对胚胎干细胞的自我更新机制及分化全能性的机理还在进一步的研究中。其中对胚胎干细胞表面特异性蛋白的研究具有非常重要的意义。这种特异性蛋白的存在也许是维持其细胞特异性的依据。本实验利用噬菌体展示技术,得到了九条能与小鼠胚胎干细胞特异性结合的十二肽。这种特异性的多肽可以广泛的应用于胚胎干细胞标记、胚胎干细胞的鉴定、靶向给药以及细胞信号通路等研究。为了除去非特异性的多肽,本实验采用了减数杂交筛选法,即用自由分化的小鼠胚胎干细胞作为负筛材料,除去那些非特异性的噬菌体多肽,然后再用未分化的小鼠胚胎干细胞作为正筛材料,得到能与其特异性结合的多肽。经过四轮的重复筛选之后,随机挑取了20个噬菌体单克隆,并对其进行测序检测,共得到了9条序列。其中除了Seq8没有得到重复序列外,其余的8条序列都得到了重复,这说明噬菌体得到了富集,这种筛选方法是非常有效的。ELISA实验证明这9条序列与未分化的小鼠胚胎干细胞都有着很强的结合力,其中Seq2的结合力最强,而它们与自由分化的小鼠胚胎干细胞及其滋养层细胞ICR的结合力均很弱。免疫荧光实验更直接的反应了Seq2单克隆噬菌体能够特异性的与未分化的小鼠胚胎干细胞细胞表面蛋白结合,而不能与分化细胞及滋养层细胞结合。Western实验证明了Seq2单克隆噬菌体能与未分化的小鼠胚胎干细胞细胞膜上的两种大小约为20KD的膜蛋白结合。这说明,筛选得到的多肽确实具有对小鼠胚胎干细胞的特异性结合能力。这些都说明了,利用噬菌体展示技术对胚胎干细胞的筛选是可行且有效的。