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目的 通过使用硫代磷酸化修饰的针对细胞核增殖相关抗原Ki-67 mRNA的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN）,观察该反义寡核苷酸抑制Ki-67抗原基因表达,从而抑制HEPG-7402细胞体外增殖作用,以期为今后肝癌的基因治疗提供新的手段。 方法 人工合成经硫代磷酸化修饰的反义链和无义链寡核苷酸。其中反义链是与Ki-67 mRNA起始密码子后碱基互补的23bp的反义寡核苷酸（ASODN）片断;无义链寡核苷酸（NSODN）与Ki-67 mRNA无配对关系。根据作用药物不同,分为ASODN作用组（处理药物为ASODN）;NSODN作用组（处理药物为NSODN）;1640作用组（处理药物为单纯无血清1640培养基）。上述药物作用于人肝癌细胞株HEPG-7402,通过MTT比色实验法确定细胞正常生长所需的最低血清浓度、绘制细胞生长曲线、测定细胞生长抑制率;HE染色方法观察对细胞形态学的影响;免疫细胞化学（Immunocellulerchemistry ICC）方法观察该反义寡核苷酸对HEPG-7402细胞Ki-67标记指数（Labeling index LI）的影响;半定量RT-PCR（Semi-quantitative RT-PCR）方法观察Ki-67mRNA表达水平的改变;流式细胞术观察对细胞周期的影响;激光共聚焦显微镜观察Ki-67抗原表达量的变化;软琼脂集落形成实验初步模拟肿瘤细胞在体内的生长状态,观察ASODN对人肝癌细胞株HEPG-7402侵袭能力的影响。 结果 1.经ASODN作用的细胞浆浓缩、胞核蓝染。 2.MTT比色法结果表明: a) HEPG-7402细胞正常生长所需培养基的最低血清浓度是3%: b) 该ASODN的IC50约为8.2μmol/L; c) ASODN作用组的HEPG-7402细胞增殖受到明显抑制,抑制率约为63.6%;NSODN作用组抑制率约为22.6% d)ASODN作用48h时,对胞增殖的抑制作用最明显（P〈0.05）。 3.通过免疫细胞化学法计算Ki-67标记指数（LI）在ASODN作用组为0.6775±0.084;NSODN作用组为0.8583±0.052;1640作用组为0.8846±0.085。ASODN作用组Ki-67标记指数（LI）低于对照组（P〈0.01）。 4.半定量RT-PCR方法根据电泳条带灰度值判断发现实验组Ki-67mRNA灰度值（34.43±3.85）较1640组（52.68±7.7）和NSODN（49.33±6.86）组低（P〈0.01）,说明该ASODN抑制了Ki-67mRNA合成。