【摘 要】
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第一部分:帕金森病患者抗大鼠黑质膜蛋白IgG抗体的提取;【目的】用免疫亲和层析法提取帕金森病患者抗大鼠黑质膜蛋白的IgG抗体,检测其方法学的特异性.【方法】差速离心法粗提
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第一部分:帕金森病患者抗大鼠黑质膜蛋白IgG抗体的提取;【目的】用免疫亲和层析法提取帕金森病患者抗大鼠黑质膜蛋白的IgG抗体,检测其方法学的特异性.【方法】差速离心法粗提SD大鼠黑质质膜,并将其偶联至CNBractivitieed—sepharose 4B上,将IgG例临床确诊的PD病人血清上柱,收集洗脱峰,将洗脱产物进一步通Protein A亲和层析柱,收集洗脱峰,采用间接ELISA和SDS-PAGE分别检测洗脱产物的抗原结合活性和纯度.【结论】免疫亲和层析法可获得PD病人抗大鼠黑质膜蛋白的IgG抗体.第二部分:抗大鼠黑质膜蛋白IgG抗体对黑质的免疫损伤作用研究;【目的】检测所提取的IgG抗体对黑质DA神经元的免疫损伤作用,并进一步探讨PD IgG抗体通过黑质膜蛋白介导DA神经元损伤的作用机制,初步研究可能的靶抗原定位和性质.【方法】将提取的PD IgG、正常人IgG和PBS分别立体定向注入大鼠一侧的黑质致密部,免疫组化检测三组的TH阳性细胞数.用注射侧的细胞数比非注射侧的细胞数,以其比值大小代表注射物对黑质的损伤作用.SDS-PAGE分离差速离心后所得的三组沉淀成分,将提取的抗大鼠黑质膜蛋白的IgG抗体作为一抗进行免疫印迹分析.【结论】抗大鼠黑质膜蛋白IgG抗体对黑质DA神经元具有免疫损伤作用,并提示损伤的机制是通过黑质膜蛋白介导而产生的.
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