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猪轮状病毒（Porcine rotavirus,PRV）是导致仔猪发生病毒性腹泻的主要病原之一。仔猪轮状病毒腹泻危害我国养猪业,每年造成的经济损失巨大。现行疫苗在控制本病的发生与传播上效果不佳,因此,开发新型猪轮状病毒疫苗是兽医工作者义不容辞的责任。VP4是轮状病毒的主要抗原蛋白,决定了病毒的P型。它能和VP7一样独立地诱导中和抗体,其中VP4经胰酶裂解后形成的VP8*片段,含有VP4的主要中和性抗原表位,皆为线性且较为保守。理论上同一P型的轮状病毒疫苗可以诱导抗不同G型的异型免疫,而从各大洲腹泻仔猪身上分离到的轮状病毒大都是类Gottfried型（P[6]型）或者类OSU型（P[7]型）。所以我们基于轮状病毒P型的研究策略,并根据VP8*抗原表位图谱,克隆和表达猪轮状病毒Gottfried株（基因型G4P[6]）和SB-1A株（基因型G4P[7]）截短的VP8*基因（△VP8*,64-223位氨基酸）。同时分别向两种△VP8*基因的上游引入编码破伤风毒素T细胞表位P2（破伤风毒素的830844位氨基酸）的序列,原核克隆表达P2-△VP8*基因。将四种重组蛋白的可溶性部分纯化后分别与氢氧化铝佐剂混合,免疫6到8周龄雌性Balb/c小鼠,共进行三次免疫,中间间隔两周。用ELISA检测血清特异性抗体水平,比较四种蛋白的免疫原性,评价T细胞表位P2的免疫原性增强作用,以期筛选出效果最佳的猪轮状病毒亚单位疫苗候选抗原。经上述试验得到免疫原性最好的重组蛋白P2-SB-1A△VP8*后,我们研究了联合佐剂对其免疫效果的影响。利用重叠PCR的方法定点突变编码大肠杆菌不耐热肠毒素（LT）第63位氨基酸的密码子,构建无毒突变体LTK63,并进行原核克隆表达及纯化。将不同的联合佐剂CpG ODN2006+LTK63+Al（OH）3、CpG ODN2006+Al（OH）3、LTK63+Al（OH）3与P2-SB-1A△VP8*一起免疫6到8周龄雌性Balb/c小鼠,三次免疫,中间间隔两周。ELISA检测血清中特异性抗体水平和亚类抗体IgG1与IgG2a,MTT法检测各组免疫后小鼠的脾脏中T淋巴细胞转化程度。所有检测指标显示,CpG ODN2006+Al（OH）3是最为有效的联合佐剂,该组小鼠的几何平均抗体滴度（GMT）高达1:55153.5,显著高于仅免疫P2-SB-1A△VP8*+Al（OH）3的对照组（1:8444.9）,P2-SB-1A△VP8*+CpG ODN2006+LTK63+Al（OH）3和P2-SB-1A△VP8*+LTK63+Al（OH）3实验组的GMT分别为1:14367.5和1:11403.5。且P2-SB-1A△VP8*+CpG ODN2006+Al（OH）3实验组小鼠血清中的亚类抗体以IgG2a为主,IgG2a/IgG1的比值为2.15,对照组仅为0.21,另两组约为1.0;该组小鼠脾脏中T淋巴细胞增殖刺激指数（SI）为2.65,显著高于对照组（1.503）,另两组在2.0左右。由此可见,联合佐剂CpG ODN2006+Al（OH）3能全面提高机体的体液免疫与细胞免疫水平,二者表现出明显的协同效应。