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本论文分为两部分:综述和研究报告。第一部分对电化学发光的发展概况、基本原理和类型及其近年来在生物分析中的新发展做了综述。内容涉及电化学发光在生物传感器研究、免疫分析和DNA探针、表面分析和酶分析中的应用。最后对电化学发光分析法未来的发展做了展望。第二部分研究报告包含三项研究工作:(1)设计出一种整合了通透性预氧化膜的电流型葡萄糖传感器,(2)研究了乙醇对二茂铁-鲁米诺-双氧水体系电化学发光的增强作用,(3)合成并分离出鲁米诺-地高辛复合物并对其进行均相电化学发光免疫性质进行了研究。 第一部分综述 电化学发光分析的原理及其研究进展 电化学发光(ECL)分析法具有灵敏度高、选择性好、可控性强、线性范围宽、观察方便、仪器简单和一些试剂可以重复使用等优点,近年来引起人们极大的研究兴趣。 ECL研究发展至今已发现了很多ECL体系,大致可以将其分为如下四类:(1)稠环芳烃类的ECL,(2)酰肼类的ECL,(3)金属配合物和原子簇化合物的ECL,(4)氧化物覆盖电极上的阴极发光。这些ECL体系虽然都涉及激发态分子以光的形式释放能量回到基态但发光机理不同。ECL在生物传感器研究、免疫分析和DNA探针、表面分析和酶分析中得到了广泛的应用。如何将STM等显微技术与ECL技术结合以促进人们对生物大分子二级结构的认识、开发新的ECL试剂以及解决电极污染和毒化是ECL分析法当前发展中面临的问题。 第二部分研究报告 一通透性预氧化膜电流型葡萄糖传感器的研究 测定过氧化氢在电极上的氧化电流的第一代生物传感器和一些检测电子转移介体在电极上的氧化电流的第二代生物传感器在测量时常需要施加高的氧化电位(>+0.6V vs饱和甘汞电极,SCE)。这使得生物传感器常受到生物样品中存在的抗坏血酸和尿酸等还原性物质的干扰。设计了一种基于固定电子介体层、酶层和通透性预氧化膜层为一体的电流型葡萄糖传感器。该传感器具有良好的通透性和干扰消除能力(1mmol L-1葡萄糖存在时2.6mmol L-1抗坏血酸,1.6mmol L-1尿酸不产生干扰),在+0.55V(vs SCE)的高工作电位下仍保持较高的选择性和较快的响应 速度门0秒)。传感器中的预氧化层不破坏葡萄糖氧化酶的活性,对葡萄糖响应 迅速。有希望应用于临床测定中。 二 乙醇对鲁米诺-过氧化氢-二茂铁体系电化学发光增强作用的研究 首次发现乙醇对铂电极上鲁米洛过氧化氢.二茂铁体系的电化学发光具有增 强作用、对鲁米诺-过氧化氢背景电化学发光具有抑制作用。研究了在乙醇存在下, 铂电极上鲁米诺-过氧化氢.二茂铁电催化化学发光行为,优化了测定二茂铁和鲁 米诺的分析抓。研究结果表明乙醇能促进二茂铁的氧化,加速电催化化学发光 过程。还考察了鲁米诺-过氧化氢-二茂铁电化学发光体系在分别含有甲醇、异丙 醇、正丁醇、乙二醇、丙三醇和乙睛的水溶液中的电化学发光行为,发现甲醇、 丙三醇对鲁米诺-过氧化氢-二茂铁体系的电化学发先强度也具有增强作用。建立 了测定鲁米诺和二茂铁的电化学发光分析法,对利用该体系建立均相电化学发先 免疫分析方法有一定的促进作用。 三鲁米诺-地高辛的合咸、分离及其均相电化学发光免疫性质的研究 提出了鲁米诺标记小分子半抗原地高辛进行均相电化学发光免疫分析的新分 析方法。建立了鲁米诺-地高辛复合物合成和分离的新方法。设计了两种分别利用 位阻法和膜排阻法进行均相电化学发光免疫的模式。对鲁米诺-地高辛复合物的电 化学发光性质进行了探讨。初步实验表明用鲁米诺标i乙卜分子半抗原利用位阻法 进行均相电化学发光免疫测定具有可行性。