梗阻性黄疸(obstructive jaundice,OJ)是指排泄胆汁的胆道系统因机械性的梗阻,致使胆汁无法顺畅地排泄到肠道所引起的黄疸。梗阻性黄疸一般需要手术治疗,其术后约11％患者会产生肾功能衰竭,死亡率约32％-100％[1].　　 肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是一种促炎性细胞因子,TNF-α主要是由内毒素刺激单核巨噬细胞产生。梗阻性黄疸时受内毒素刺激单核巨噬细胞系统产生大量的TNF-α[2],又因为血清中的TNF-α主要在肝脏清除,梗阻性黄疸时肝脏受到损伤使其清除TNF-α的能力大大下降,这导致TNF-α在肝内处于较高的水平,Bemelmans[2]通过试验测定梗阻性黄疸大鼠血液循环中的TNF-α明显高于对照组,过多的TNF-α会导致肝、肾功能的损伤。　　 有研究发现[3,4,5]:TNF-α可增强肾小球前小动脉平滑肌细胞内的1,4,5-三磷酸肌醇受体(inositol1,4,5-triphosphate receptor,IP3R)的表达,并可增加细胞外钙内流。OJ时肾损害的发生与TNF-α增强肾小球前小动脉平滑肌细胞内的IP3R的表达,从而增加细胞外钙内流,致使肾皮质血流量减少有关。本研究拟采用胆总管结扎致梗阻性黄疸大鼠模型,并通过腹腔内注射肿瘤坏死因子-α单克隆抗体,病理学观察OJ大鼠肾脏形态学改变,通过Western blot和免疫组织化学方法检测IP3R在肾组织的含量和表达;来研究TNF-α单克隆抗体对梗阻性黄疸大鼠肾功能的影响及其机制。为临床治疗OJ所致肾损害提供理论依据。　　 目的:通过胆总管结扎(common bile duct ligation,CBDL)制作梗阻性黄疸大鼠模型,并腹腔内注射肿瘤坏死因子-α单克隆抗体,研究抑制TNF-α表达后肾脏功能和形态的变化和IP3R在肾组织表达的变化。　　 方法:将60只雄性Sprague Dawley大鼠随机分成假手术组(sham组)、模型组(分为CBDL术后1week、2week、3week、4week和5week五个亚组)和干预组(分为CBDL术后1week干预1week、2week、3week和4week四个亚组)。模型组分别于结扎后1wk、2wk、3wk、4wk、5wk麻醉动物,干预组于结扎后第2周开始腹腔注射肿瘤坏死因子-α单克隆抗体(0.1mg/kg/2d),并于干预后1wk、2wk、3wk、4wk麻醉动物,sham组与5wk模型组动物同批麻醉,留取肝、肾组织、血标本。采用肝脏HE染色和Masson三色染色,肾脏HE染色确定模型建立情况,并与干预组与模型组对比;采用生化方法检测肝、肾功能变化,通过Western blot方法检测IP3R的含量;免疫组织化学方法检测IP3R在肾组织的表达。用单因素方差分析和SNK-q检验统计分析。　　 结果:　　 1肝脏及肾脏病理改变　　 肝脏组织HE及Masson染色显示:sham组HE染色显示肝小叶结构完整,肝板排列整齐;Masson三色染色仅在门管区可见少量结缔组织。CBDL组肝脏小胆管广泛增生,胆管扩张,纤维组织增生,假小叶形成。干预组大鼠HE染色显示肝脏小叶结构变化不明显,小胆管仍有增生;Masson染色显示门管区胶原纤维轻微增多,未见假小叶形成。　　 肾组织HE染色显示:sham组:肾小球体积形态正常,肾小管上皮细胞排列规整,肾脏未见明显病理改变,仅见少量结缔组织。CBDL组:造模2周时肾细胞肿胀,肾间质可见少量炎性细胞浸润,未见明显坏死灶,可见黄色颗粒,结缔组织明显增多;造模5周组肾小管上皮细胞肿胀,排列不规整,水样空泡变性、脱落,同时可见局灶上皮细胞坏死,胞浆崩解,间质有大量炎性细胞浸润,结缔组织增生更加明显。干预组大鼠肾脏病变较CBDL组明显减轻,炎性细胞浸润明显减少,间质充血未见,结缔组织较模型组略少。　　 2肝功能检测:　　 造模1周后,CBDL组血浆ALT明显增高,与sham组比较有明显差异(P＜0.05)。之后虽逐渐下降,但均明显高于sham组。TNF-α单克隆抗体干预治疗后1周即较同周CBDL组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05),之后呈下降趋势,至治疗后4周仍高于sham组,但是差异无统计学意义(P＞0.05)。　　 3肾功能检测:　　 CBDL组在CBDL术后血浆CREA逐渐上升,于第三周达到峰值之后逐渐下降,但均明显高于假手术组(P＜0.05)。TNF-α单克隆抗体干预治疗后与同周CBDL组比较CREA水平明显下降(P＜0.05),但仍高于sham组(治疗2周组P＜0.05,之后P＞0.05)。　　 血浆BUN在CBDL术后造模组明显升高,与sham组有明显差异(P＜0.05)。TNF-α单克隆抗体干预治疗后较同周CBDL组明显下降(P＜0.05),但仍明显高于sham组(治疗2周组P＜0.05,之后P＞0.05)。　　 4内毒素检测:　　 CBDL组造模术后1周起,血浆内毒素水平显著升高,之后在此水平波动,3周时有所下降,但仍显著高于sham组(P＜0.05)。5周时又回升至术后1W水平。TNF-α单克隆抗体干预治疗后1周血浆内毒素水平开始明显下降,且较同周CBDL组明显降低(P＜0.05),之后逐渐下降,但仍显著高于sham组(治疗4周时P＜0.05,之后P＞0.05)。　　 5血浆TNF-α检测:　　 CBDL术后1周血浆TNF-α水平即明显升高,之后呈上升趋势,3周时血浆TNF-α水平达高峰,4周时有所回落,5周又开始回升,但均明显高于sham组(P＜0.05)。TNF-α单克隆抗体干预治疗后1周即开始明显降低,之后继续下降,但仍高于同周sham组(治疗4周时P＜0.05,之后P＞0.05)。　　 6肾组织IP3R的表达　　 免疫组织化学结果显示,CBDL组肾组织IP3R蛋白表达较多,可见棕褐色的阳性颗粒主要集中于肾小球系膜细胞和平滑肌细胞的胞浆内,与sham组有显著差异(P＜0.05)。TNF-α单克隆抗体干预后IP3R蛋白表达下降,与CBDL组比较,表现为阳性着色变少,但均明显高于sham组(P＜0.05)。　　 Western blot分析在260KD的位置上出现杂交带,从杂交信号强度可知,CBDL术后造模组2周肾组织IP3R蛋白表达即开始明显增加,与sham组有明显差异(P＜0.05)。至4周达高峰,之后又下降,并在一定范围波动。TNF-α单克隆抗体干预治疗后2周开始明显下降,与同周CBDL组有显著性差异(P＜0.05),之后在一定范围波动;与sham组比较差异也较明显(P＜0.05)。　　 结论:　　 1进一步证实了梗阻性黄疸大鼠肾功能随病情发展呈进行性损害。梗阻性黄疽14天始大鼠BUN与CREA明显增高,肾功能损伤明显。　　 2梗阻性黄疸时肾小球前小动脉平滑肌细胞内的IP3R蛋白的表达增强。　　 3应用TNF-α单克隆抗体干预治疗,可通过中和血浆TNF-α,部分降低血浆TNF-α水平,减轻肾小球前小动脉平滑肌细胞内的IP3R的表达增强的程度,部分减轻梗阻性黄疸动物肾功能损害的发生。