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背景和目的卵巢癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，由于深居盆腔，缺乏早期症状和体征，75％～80％的患者确诊时已届晚期，由于其发病机制不清，临床上尚缺乏有效的治疗手段，因此，卵巢癌是死亡率最高的妇科恶性肿瘤之一。近年来溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid，LPA）的功能以及与卵巢癌的密切关系逐渐成为卵巢癌诊断及基因治疗研究者关注的热点。LPA是具有多种生物活性的磷脂介质，可以促进肿瘤细胞的增殖、生存、蛋白酶的产生及激活和促进血管生成因子等细胞因子的生成，参与肿瘤的发生、发展、浸润、转移以及化疗耐受等过程。LPA主要由活化的血小板、脂类细胞、血管内皮细胞等分泌，卵巢癌细胞也可产生LPA，并且形成自分泌环，导致卵巢癌患者血浆及腹水中LPA水平明显升高，提示LPA在卵巢癌的发生发展过程中具有重要作用。LPA主要通过LPA受体即G蛋白偶联受体（亦即内皮分化基因蛋白endothelial differentiation gene，Edg2，Edg4，Edg7）介导的多种信号传导通路发挥其生物学效应。其中Edg2在正常细胞中高表达，Edg4和Edg7则在肿瘤细胞中过表达，在正常细胞、永生化的组织细胞中不表达或低表达，LPA与Edg2结合可促进细胞凋亡，具降调节作用；与Edg4、Edg7结合则可促进细胞内DNA合成，诱导多种细胞因子的产生等。因此推测，Edg4和Edg7的表达可能与LPA对肿瘤的作用有关。本实验首先通过生化的方法测定溶血磷脂酸在卵巢上皮性肿瘤患者血清中的表达情况，并与CA125相比较，探讨LPA对卵巢上皮性癌早期诊断的意义；然后采用免疫组化的方法比较溶血磷脂酸受体Edg4和Edg7在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达情况，并观察这两种受体蛋白与卵巢上皮性癌的临床分期、组织学分级等临床和病理参数的关系，探讨LPA促肿瘤生长的作用机制，并为寻找卵巢癌治疗的新靶点，进行后续的卵巢癌基因治疗提供实验依据。材料和方法1．选取2005年10月～2006年2月在郑州大学一附院、三附院、郑州市妇幼保健院诊治的卵巢上皮性肿瘤患者70例作为研究对象，其中卵巢上皮性癌50例（浆液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌13例），包括原发患者30例（Ⅰ期10例、Ⅱ～Ⅳ期20例）和复发患者20例；良性卵巢上皮性肿瘤20例（浆液性囊腺瘤13例、黏液性囊腺瘤6例、子宫内膜样肿瘤1例），并选择20例正常妇女作为对照，采用生化法检测各组患者血清中LPA表达水平，同时测定血清中CA125水平，并将两者进行比较，探讨LPA对卵巢上皮性癌早期诊断的意义。2．收集2000年2月～2004年10月郑州大学第一附属医院妇产科住院手术切除的卵巢上皮性肿瘤组织石蜡包埋标本68例，并经两名病理科专家会诊明确诊断。同时收集同期住院的宫颈癌和内膜癌患者手术切除的12例正常卵巢组织标本作为对照组，所有纳入对象于标本采取前均未接受放疗或化疗，临床及病理资料完整。3．80例标本具体分组为：68例卵巢上皮性肿瘤包括上皮性癌48例（浆液性囊腺癌30例，粘液性囊腺癌11例，子宫内膜样癌7例），交界性肿瘤10例，良性肿瘤10例，正常卵巢组织12例。卵巢上皮性癌按FIGO（2000年）临床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期16例，Ⅲ期18例，Ⅳ期2例；组织学分级G1级14例，G2级16例，G3级18例。其中有淋巴结转移者22例，无淋巴结转移者26例；腹水≥500ml的30例，腹水＜500ml的18例。年龄在30～60岁之间，平均42.56±4.67岁。4．采用免疫组化SP法检测80例卵巢上皮性肿瘤组织和正常卵巢组织中Edg4和Edg7蛋白的表达情况，并探讨这两种蛋白的表达与卵巢上皮性癌临床分期、组织学分级等临床和病理参数的关系。5．统计学处理：采用SPSS13.0统计软件包进行数据分析，计量资料采用单因素方差分析和Fisher精确概率法，多个样本率比较采用行×列表x2检验和秩和检验，两个样本率的比较采用四格表x2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。以α=0.05为检验水准。结果1．卵巢上皮性癌各组患者血清LPA表达水平明显升高，与正常妇女和良性卵巢上皮性肿瘤患者相比，其差别均有统计学意义（F=78.386，P＜0.05）；卵巢上皮性癌各组患者血清LPA水平相比无统计学意义（F=2.278，P＞0.05）；正常妇女和良性卵巢上皮性肿瘤患者血清中LPA表达水平相比较，其差别无统计学意义（F=2.563，P＞0.05）。而原发性卵巢癌Ⅱ～Ⅳ期组和复发组患者血清CA125水平明显高于正常妇女组、良性卵巢上皮性肿瘤组和卵巢上皮性癌原发Ⅰ期组，其差别有统计学意义（F=544.416，P＜0.05）。2．血清LPA水平用于诊断卵巢上皮性癌的敏感性为94.1％（48／51），特异性为89.5％（17／19）；血清CA125水平用于诊断卵巢上皮性癌的敏感性为87.8％（36／41），特异性为51.7％（15／29），而在卵巢上皮性癌原发Ⅰ期组，血清LPA水平为90％（9／10），血清CA125仅为30％，两者比较有统计学意义（x2=7.50，P＜0.05）。3．溶血磷脂酸受体Edg4、Edg7在卵巢上皮性肿瘤组织中的阳性表达率分别为恶性91.7％和95.8％、交界性80％和70％、良性20％和30％；而在正常卵巢组织中阳性表达率仅为16.7％和16.7％。Edg4与Edg7蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达显著高于良性卵巢上皮性肿瘤和正常卵巢组织，差异有统计学意义（Edg4：x2=38.873；Edg7：x2=40.449，P＜0.05）。4．卵巢上皮性癌组织中Edg4和Edg7蛋白在Ⅲ、Ⅳ期阳性表达明显高于在Ⅰ、Ⅱ期组织中的表达，两者比较差异有统计学意义（Edg4：x 2=17.807；Edg7：x2=15.481，P＜0.05）；G1级组织中两种蛋白的表达明显低于G2、G3级组织，比较结果差异有统计学意义（Edg4：x2=18.139；Edg7：x2=20.959，P＜0.05）；有淋巴结转移的癌组织中两种蛋白的表达明显高于无淋巴结转移的癌组织，差异有统计学意义（Edg4：x2=10.741；Edg7：x2=6.325，P＜0.05）；腹水≥500ml的癌组织中两种蛋白的表达明显高于腹水＜500ml的癌组织，比较结果差异有统计学意义（Edg4：x2=5.807；Edg7：x2=4.434，P＜0.05）。5．Edg7蛋白在卵巢上皮性癌组织中的表达阳性率高于Edg4蛋白，但两者表达趋势一致，比较的结果，两者的表达呈正相关。（rs=0.978，P＜0.05）。结论1．卵巢上皮性癌患者血清LPA水平明显升高，其敏感性和特异性均高于血清CA125，尤其在卵巢上皮性癌原发Ⅰ期组。LPA有望成为卵巢上皮性癌早期诊断和术后病情监测的生物学标记物。2．溶血磷脂酸受体Edg4与Edg7蛋白在卵巢上皮性癌组织中高表达，与上皮性癌的恶性程度、临床分期、组织学分级等有关。3．Edg4和Edg7受体蛋白在卵巢上皮性癌组织中表达程度呈正相关，提示两者在卵巢上皮性癌的发生发展中具有协同作用，并有望成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。