【摘 要】
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在用GST融合蛋白表达系统成功表达成纤维细胞生长因子受体外片段(EFGFR)的基础上,用Glutathione-Sepharose 4B树脂将GST-EFGFR一步从细菌裂解液中提纯.以GST-EFGFR作为靶分子
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在用GST融合蛋白表达系统成功表达成纤维细胞生长因子受体外片段(EFGFR)的基础上,用Glutathione-Sepharose 4B树脂将GST-EFGFR一步从细菌裂解液中提纯.以GST-EFGFR作为靶分子,先后用两种不同的方法,在抗体库中筛选EFGFR的特异性抗体片段,由于GST抗原性太强,未能成功屏蔽融合蛋白中的GST部分对筛选的影响,酶联免疫分析表明阳性克隆均是与GST特异性结合的.筛选中同时发现,每轮筛选总的KD值可以作为衡量筛选效率的一个可靠的内在指标.用筛选出的阳性克隆摸索单链抗体定向进化条件,用易错PCR突变抗体基因,用StEP成功扩增出了重组的单链抗体基因.
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