丙戊酸钠对人卵巢癌HO8910细胞生长作用影响的实验研究

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weihc
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目的:研究丙戊酸钠对人卵巢癌HO8910细胞生长的影响,寻求卵巢癌治疗的新途径。  方法:体外试验:体外培养卵巢癌细胞株HO8910,分别加入含不同浓度丙戊酸钠(浓度分别为1.0mmol/L、2.0mmol/L、3.0mmol/L、4.0mmol/L)的培养液继续培养(实验组),以常规培养的HO8910细胞株作为对照组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜技术、流式细胞术(FCM)及蛋白印迹法(Westernblot)分别检测各组细胞的细胞增殖能力的变化、细胞形态学变化、细胞周期及凋亡率的变化、WWOX蛋白和P27蛋白表达水平的变化。体内试验:建立HO8910细胞裸鼠皮下移植瘤模型,并随机分组。实验组给予含0.4%丙戊酸钠的PBS,对照组给予无菌PBS并常规饲养,观察两组裸鼠的生存时间及肿瘤生长情况,并采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测两组裸鼠肿瘤组织中WWOXmRNA、P27mRNA及WWOX蛋白和P27蛋白表达水平的变化。  结果:(1)MTT检测结果显示:实验组细胞各浓度的光密度(OD)值分别为:(0.793±0.031)、(0.6842±0.045)、(0.5294±0.057)、(0.3814±0.042),与对照组细胞OD值(0.9052±0.014)相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞随着药物浓度的增加,不同浓度细胞组间的OD值差异亦均有统计学意义。(2)倒置显微镜下观察可见,对照组细胞生长状态良好,随着药物浓度的增加,实验组细胞形态逐渐变圆、胞质回缩加剧、漂浮细胞逐渐增多。(3)FCM结果显示:实验组分别有(55.78±0.79)%、(59.64±0.64)%、(70.32±1.02)%、(76.34±0.96)%的细胞被阻滞于G0/G1期,与对照组细胞(50.2±0.82)%相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞随着药物浓度的增加,不同浓度细胞组间的G0/G1期细胞阻滞率亦均有差异(P<0.05)。实验组细胞的凋亡率分别为:(10.39±1.10)%、(29.31±1.19)%、(38.70±1.23)%、(46.96±1.37)%,与对照组细胞(4.4±1.16)%相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞随着药物浓度的增加,不同浓度细胞组间的凋亡率亦均有差异(P<0.05)。(4)Western blot检测结果显示:实验组细胞WWOX蛋白表达水平分别为:(0.19±0.015)、(0.29±0.037)、(0.46±0.035)、(0.55±0.016),与对照组(0.13±0.032)相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞随着药物浓度的增加,不同浓度细胞组间的WWOX蛋白表达水平亦均有差异(P<0.05)。实验组P27蛋白表达水平分别为:(0.18±0.028)、(0.27±0.013)、(0.36±0.032)、(0.46±0.017)与对照组(0.11±0.019)相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞随着药物浓度的增加,不同浓度细胞组间的P27蛋白表达水平亦均有差异(P<0.05)。(5)裸鼠体内实验表明,实验组裸鼠的生存时间及肿瘤平均体积分别为:(47.12±0.73)天、(1264.59±24.83)mm3与对照组分别为:(34.58±0.46)天、(2155.62±73.38)mm3相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,实验组WWOX mRNA及P27mRNA的表达水平分别为:0.305±0.015、0.926±0.034,其与对照组(分别为:0.193±0.056、0.702±0.047)相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测结果显示,实验组WWOX蛋白及P27蛋白的表达水平分别为:0.46±0.065、0.394±0.018,其与对照组(分别为:0.15±0.025、0.20±0.067)相比较差异均有统计学意义(P<0.05)。  结论:丙戊酸钠能够抑制HO8910细胞的增殖、干扰其细胞周期并促进HO8910细胞的凋亡,其机制可能与WWOX基因和P27基因的表达上调有关。
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