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家蚕30K蛋白是家蚕5龄幼虫时期血淋巴中表达量最高的蛋白,是家蚕发育时期主要的能源物质,具有多种生物学功能。目前已经报道的家蚕30K蛋白共有5种,分别为BmLp-C6、BmLp-C12p、BmLip19G1、pBmHPC-21和pBmHPC-23。根据己知的5种30K蛋白的氨基酸序列,利用NCBI在线BLAST工具在家蚕蛋白质数据库中进行相似性搜索,发现一种蛋白(Slp)的氨基酸序列(蛋白序列号为NP001119728)与已知的5种家蚕30K蛋白氨基酸序列相似度均达到41%以上,且具有共同的保守结构域Lipoprotein-11,它们的三级结构也极其相似,因此,推测其可能是家蚕30K蛋白家族新成员。
为了研究Slp蛋白功能,本研究利用NCBI查找获得了编码SIp蛋白的基因序列,然后利用RT-PCR技术从家蚕五龄幼虫脂肪体中克隆得到slp的cDNA序列,并在大肠杆菌中诱导表达。利用镍亲和层析法获得的纯化SIp蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,用于该蛋白的亚细胞定位和组织表达分析。亚细胞定位结果显示,SIp在BmN细胞中主要存在于细胞膜上和细胞质中;蛋白免疫印迹法检测Slp蛋白在家蚕不同发育时期与5龄家蚕不同组织中的表达分布情况,结果显示该蛋白在5龄幼虫期的表达量最高,蛹期次之,蛾期和卵期最少;Slp在5龄幼虫血淋巴和脂肪体中表达量最高,在其他组织中表达量较少。
已有研究结果表明家蚕血淋巴具有抗凋亡活性,而起主要抗凋亡作用的即为家蚕30K蛋白。因此,我们推测Slp蛋白也具有相似的生物学活性。为了研究Slp蛋白的生物学功能,利用家蚕杆状病毒表达系统(Bac-to-BacSystem),在BmN细胞中表达、纯化了Slp蛋白。将纯化的Slp蛋白作用于H202处理的BmN细胞与HUVEC细胞中,MTT检测细胞活力,结果显示Slp蛋白在一定程度上可增强H202诱导的两种细胞的活力;ELISA法检测细胞内DNA片段化,结果显示Slp蛋白也可降低细胞内DNA的片段化程度。上述研究结果表明家蚕SIp蛋白对H2O2处理的HUVEC细胞与BmN细胞凋亡均有一定的抑制作用,与已知的家蚕30K蛋白具有相似的生物学功能,很可能是家蚕30K蛋白家族的新成员。其抗细胞凋亡的作用机制还有待于进一步研究。