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第一部分PMQ—上调成熟3T3-L1脂肪细胞脂联素的表达目的:成熟的脂肪细胞是机体脂肪组织中主要的细胞组分,本实验研究PMQ对成熟的3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及可能存在的量效关系和时效关系=方法:3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟后,给予不同浓度PMQ(0.1,0.3,1,3,10μM),作用24小时,检测脂肪细胞脂联素mRNA和蛋白质表达水平。观察给予3μMPMQ后0,3,6,12,24,48小时各时间点脂联素表达的变化。结果:PMQ上调成熟3T3-L1脂肪细胞的脂联素mRNA及蛋白质表达,此作用呈明显的浓度和时间依赖性。第二部分PMQ上调脂联素表达的机制研究目的:研究PMQ增强脂联素表达的分子机制=方法:3T3-L1前脂肪细胞分化成熟后,给予不同浓度PMQ(0.1,0.3,1,3,10 gM),作用24小时。分别检测各组脂肪细胞PPARγ、TNF-α和IL-6的mRNA和蛋白质表达水平;TNF-α和IL-6的分泌水平;AKT的磷酸化水平。观察PPARγ拮抗剂GW9662(10μM)和PI3K抑制剂wortmannin (100 nM)对PMQ上调脂联素表达作用的影响。结果:口PMQ浓度依赖性促进PPARγmRNA和蛋白质表达。口PMQ对总AKT无明显影响,但浓度依赖性促进磷酸化AKT的表达。口GW9662和wortmannin本身对脂肪细胞脂联素的表达无明显影响,但能明显拮抗PMQ增强adiponectin mRNA和蛋白质表达的作用。口PMQ浓度依赖性降低TNF-a和IL-6 mRNA表达和分泌.结论:PMQ同过增强PPARy和磷酸化AKT,降低TNF-α和IL-6的表达及分泌增强脂联素的表达。第三部分PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响目的:脂肪细胞的年更新率约为20%,即每一瞬间都有相当比例的细胞处在分化过程中,本实验研究PMQ对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响。方法:对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,全程给予PMQ(6天)。分化的第六天提取总RNA和总蛋白,分别检测PPARs和脂肪细胞因子mRNA表达水平、PPARγ和脂联素蛋白质表达水平。结果:口PMQ明显促进PPARα, PPARβ和PPARγ的mRNA表达水平和PPARγ蛋白质表达;口PMQ明显促进脂联素的mRNA和蛋白质表达;口PMQ明显降低TNF-α和IL-6 mRNA表达水平;PMQ对FGF-21表达无明显影响。结论:PMQ促进分化过程中脂肪细胞PPARs表达,促进脂联素mRNA和蛋白质表达,抑制IL-6及TNF-αmRNA表达,对FGF-21表达无明显影响。第四部分5-PBDMA对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响目的:研究5-苯氧丁基二甲基芹菜素(5-BPDMA)对分化过程中脂肪细胞PPARs和脂肪细胞因子表达的影响。方法:对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,全程给予5-PBDMA(6天)。分化的第六天提取总RNA,检测PPARs和脂肪细胞因子mRNA表达水平。结果:口5BP-DMA对分化过程中脂肪细胞PPARs家族的mRNA表达无明显影响;口低浓度的5-PBDMA(0.1,0.3μM)明显促进脂肪细胞脂联素mRNA表达,较高浓度5-PBDMA(3,10μM)抑制脂联素mRNA表达;□5-PBDMA明显抑制IL-6和TNF-αmRNA表达水平,对FGF-21表达无明显影响。结论:5-PBDMA对PPARs表达无明显影响,抑制TNF-α和IL-6表达,对脂联素mRNA表达的影响呈双向。