核桃举肢蛾（Atrijuglans hetaohei Yang）属鳞翅目Lepidoptera,举肢蛾科Heliodinidae,是一种专门蛀食核桃果实的害虫。它以幼虫蛀入果内危害果皮和核桃种子,使核桃的果皮变黑,果实干缩,经济损失巨大。目前,防治核桃举肢蛾以树冠喷洒化学农药防治成虫、卵和初孵化的幼虫,但是对蛀入核桃果内的幼虫起不到防治作用。而且化学农药有污染、残留等问题。根据核桃举肢蛾老熟幼虫入土结茧越冬的习性,本研究展开以入土幼虫为靶标,利用昆虫病原真菌在表土层中感染幼虫,进行生物防治的研究。研究内容:（1）在山西盂县设立核桃实验林地,调查核桃举肢蛾越冬幼虫的虫口密度,观察核桃果实内幼虫的发育进度和危害状况,并对幼虫干尸的化学成分进行分析,测定其蛋白质、脂肪、几丁质及氨基酸的含量。为利用病原真菌提供依据。（2）从自然染病的核桃举肢蛾幼虫上分离获得一株病原真菌,对该菌株进行回接杀虫实验,形态特征观察和分子鉴定。（3）比较分离得到的菌株与来自不同寄主昆虫的球孢白僵菌3菌株对核桃举肢蛾的致病力。（4）对分离获得的病原菌株作了生物学特性和野外宿存试验。研究结果:1.核桃举肢蛾越冬虫口密度调查,幼虫果内发育和危害观察及幼虫干尸化学成分测定1.1越冬虫口密度和幼虫特征:调查显示,在3、4月份,核桃举肢蛾越冬幼虫在土壤内的密度为78^-102头/m2,其中活茧为9^-18头/m2,茧内的越冬幼虫,头部黄褐色,虫体为白色,体长5-7mm。自然染病的幼虫为1^-1.5头/m2。1.2幼虫在果实内的发育与危害:将虫害核桃解剖镜检,发现在危害初期,核桃果皮仍然保持青绿,幼虫钻蛀的虫孔和坑道都比较细小;危害中期,果实青皮上出现黑色斑块,虫体长大,果肉被大量蛀食,形成纵横交错的黑色坑道,内有虫粪;危害后期,核桃果皮大部分变黑,大部分果肉已被蛀食,形成许多虫孔和坑道,并充满大量虫粪;危害末期,幼虫发育接近成熟,果皮完全变黑,果肉几乎被完全蛀食,只剩下大量的虫粪。在钻蛀的核桃内幼虫平均6-7头,多的达13头。幼虫老熟后钻出核桃入土,刚脱果的幼虫体长6-9mm;头部黄褐色,虫体色浅,淡红,腹部末端2节呈白色。1.3幼虫干尸化学成分:经测定,幼虫干尸中蛋白质、脂肪和几丁质的含量分别为51g/100g,28g/100g和21g/100g。17种氨基酸总含量为47.24g/100g,其中以谷氨酰胺、天冬氨酸含量较多,分别为6.02g和5.17g。2.核桃举肢蛾病原真菌BXY01菌株的分离纯化与鉴定在越冬虫茧中自然染病的幼虫虫尸上,发现有虫生真菌寄生。染病虫体僵硬,表面有白色菌丝。从中分离获得一株病原真菌BXY01。作回接杀虫试验,其感染症状与自然染病虫尸的症状相同,证明该菌株是核桃举肢蛾的病原真菌。培养后观察,该菌株的菌落为绒毛状,菌丝致密,边缘整齐,菌落背面初期白色,后期淡黄色。菌丝白色,呈"之"字形弯曲生长产孢,根据形态学特征,鉴定该菌株为白僵菌属的球孢白僵菌。采用分子鉴定技术,将获得该菌株的ITS区域序列,提交至GenBank,获得Accession No.KU214583,经比对分析,BXY01菌株与GenBank中Beauveria bassian（Accession No.JN379794、No.JN379807、No.JN379808）同源性均为99%。结合形态学和分子鉴定结果,确定分离的BXY01菌株为白僵菌属的球抱白僵菌Beauveria bassiana。3.比较BXY01菌株与球孢白僵菌其他3个菌株对核桃举肢蛾的致病力选用球孢白僵菌3菌株,FDB01（原寄主为红松帕克阿扁叶蜂）、TST05（原寄主为桃小食心虫）、SYN01（原寄主为松毛虫）,与分离得到的BXY01菌株制备孢子悬浮液（浓度为1×10⁸孢子/mL）对核桃举肢蛾幼虫进行感染试验。结果显示,核桃举肢蛾第8d的校正致死率分别为87.8±5.2%、84.4±4.5%、91.1±2.4%和93.3±4.3%。致死中时分别为4.743d、4.934d、4.098d和3.760d,说明4个菌株对核桃举肢蛾幼虫都有较高的致死率,较短的致死中时,其中以BXY01为最优。BXY01菌株5个浓度孢子悬浮液（1×10⁹孢子/mL、5×10⁸孢子/mL、1×10⁸孢子/mL、5×10⁷孢子/mL、1×10⁷孢子/mL）对核桃举肢蛾幼虫感染后第8d的校正致死率依次为100%、95.56±4.2%、93.3±4.3%、85.7±12.3%和76.7±7.2%。致死中时依次为3.253d、3.519d、3.760d、4.270d和4.843d。说明该菌株对核桃举肢蛾幼虫的致死率和致死中时具有浓度效应。4.BXY01菌株的生物学特性和在野外土壤中的宿存4.1生物学特性:试验证明,BXY01菌株温度适应范围较广,在15℃到35℃间都能够生长,产孢和萌发,其中在25℃下菌落生长直径、产孢量、孢子萌发率都最高。培养7d,菌落直径3.87±0.03cm,产孢量11.48±0.81×10⁷孢子/mL,孢子萌发率67.5±4.5%。经紫外线照射（30min）后,菌落生长直径、产孢量、孢子萌发率比对照组均有所降低,但差异未达到显著水平。说明该菌株具有一定的抗紫外能力。4.2菌在土壤中的宿存情况:9月份在土壤中施用球孢白僵菌后（102.38±6.29×10⁴CFU/g）,逐月检查在0cm、5cm、10cm和15cm深度土壤中菌的宿存数量（以成菌落数计）,结果显示,10月份为27.76±1.89×10⁴、42.04±3.21×10⁴、35.44±2.16×10⁴和21.97±2.13×10⁴CFU/g;11月份为8.35±1.35×10⁴、19.10±1.53×10⁴、14.31±1.80×10⁴和11.11±1.83×10⁴CFU/g。12月份为1.22±0.25×10⁴、8.27±1.01×10⁴、5.89±0.93×10⁴和3.50±0.57×10⁴ CFU/g。到次年2月份,为0.42±0.16×10⁴ CFU/g、4.36±0.33×10⁴、4.75±0.57×10⁴和3.74±0.34×10⁴ CFU/g。3月份为0.1±0.07×10⁴、4.37±0.36×10⁴、4.63±0.51×10⁴和3.72±0.58×10⁴CFU/g。由此可见,菌的宿存数量呈持续下降趋势,9月^-11月菌宿存数量的下降明显,12月份-3月份菌的宿存数量在一定范围内波动,土壤层5^-10cm较0cm和15cm处的菌的宿存数量较多,说明5^-10cm的土壤层温湿度相对稳定,更适宜菌的宿存,而核桃举肢蛾幼虫越冬也主要集中在此范围,为利用真菌防治提供了良好的条件。